便可通片高效液相指纹图谱研究及多指标成分定量分析（一）

便可通片为治疗便秘的创新中药，是湖南时代阳光药业股份有限公司具有知识产权的独家品种，处方由生地黄、玄参、当归、桃仁、肉苁蓉、火麻仁、决明子、枳实、芦荟9味中药组成，是在全国名老中医刘炳凡老先生经验方基础上研制成的中药片剂，具有养阴生津，润肠通便的功效，用于治疗功能性便秘。临床研究表明，便可通片对治疗阴虚血瘀型功能性便秘具有较好的疗效，可明显改善患者临床症状，缩短排便间隔天数和每次排便时间，疗程短，停药后随访疗效较好，无明显不良反应。目前中成药标准普遍采用单一成分进行研究，难以全面表征处方的物质基础。便可通片质量标准（草案）中仅对处方中的阿魏酸进行定量测定，标准较简单，且阿魏酸含量较低，难以全面控制产品质量。本课题组首次对不同批次便可通片进行高效液相（HPLC）指纹图谱研究，并对其中的主要有效成分松果菊苷、柚皮苷、新橙皮苷、芦荟苷进行定量测定。

1仪器与材料

1.1仪器

DionexUltiMate3000系列高效液相色谱仪（美国Thermofisher公司）；Quintix224-1CN电子分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；KM-500DB超声波清洗仪（功率500W，频率40kHz，昆山市美美超声仪器有限公司）。

1.2材料

对照品芦荟苷（批号：110787-201808,92.4%）、新橙皮苷（批号：111857-201804，纯度：99.4%）、柚皮苷（批号：110722-201805，纯度：91.7%）、松果菊苷（批号：111670-201907，纯度：91.8%）、芦荟大黄素（批号：110795-201007，纯度：98%），中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，美国天地公司；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

生地黄、玄参、当归、桃仁、肉苁蓉、火麻仁、决明子、枳实、芦荟饮片均由湖南时代阳光药业股份有限公司提供，经湖南省中医药研究院生药室刘浩副研究员鉴定，分别为玄参科植物生地RehmanniaglutinosaLibosch.的干燥块根、玄参科植物玄参ScrophularianingpoensisHemsl.的干燥根、伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根、蔷薇科植物桃Prunuspersica(L.)Batsch的干燥成熟种子、列当科植物肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma的干燥带鳞叶肉质茎、桑科植物大麻CannabissativeL.的干燥成熟果实、豆科植物决明CassiaobtusifoliaL.的干燥成熟种子、芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.的干燥幼果、百合科植物库拉索芦荟AloebarbadensisMiller植物叶的汁液浓缩干燥物。

便可通片10批，湖南时代阳光药业股份有限公司提供，批号分别为：20190601(S1）、20190602(S2）、20190603(S3）、20191201(S4）、20191202(S5）、20191203(S6）、20191204(S7）、20200101(S8）、20200102(S9）、20200103(S10）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：InertSustainC₁₈(4.6mm×250mm,5μm），流动相：甲醇（A)-0.1%冰醋酸水溶液（B）梯度洗脱（0～10min：20%～40%A；10～20min：40%A；20～30min：40%～42%A；30～50min：42%～47%A；50～80min：47%～60%A；80～90min：60%～90%A；90～100min：90%A）。检测波长：300nm；流速：1mL·min^-1；柱温：25℃；进样量：10μL；理论塔板数以芦荟苷计不低于5000。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

精密称取芦荟苷、柚皮苷、新橙皮苷、松果菊苷、芦荟大黄素对照品适量，芦荟苷用流动相甲醇-0.1%冰醋酸水溶液（39∶61）溶解并定容，配成含芦荟苷质量浓度为0.9235mg·mL^-1的对照品溶液，其余对照品用甲醇溶解并定容，配成柚皮苷质量浓度为0.7561mg·mL^-1、新橙皮苷量浓度为0.7510mg·mL^-1、松果菊苷质量浓度为0.5196mg·mL^-1、芦荟大黄素0.5488mg·mL^-1的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

取本品适量，除去包衣，研细，取约1g，精密称定，置50mL棕色量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率500W，频率40kHz，温度低于25℃）20min；放冷，加甲醇稀释至刻度线，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.3方法学考察

2.3.1精密度试验

精密吸取同一便可通片（S1）供试品溶液10μL，按“2.1”项下色谱条件，连续进样测定6次，记录其色谱图。以9号峰（芦荟苷）为参照峰，计算16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.01%～0.07%和0.91%～9.38%，其中，芦荟苷、柚皮苷、新橙皮苷和松果菊苷峰面积RSD分别为2.16%、1.16%、1.15%和2.86%，表明仪器精密度良好，符合指纹图谱的要求。

2.3.2重复性试验

取便可通片（S1)6份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件依次进样，记录色谱图。以9号峰（芦荟苷）为参照峰，计算16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.01%～0.14%和1.16%～9.81%。芦荟苷、柚皮苷、新橙皮苷和松果菊苷峰面积RSD分别为0.88%、1.83%、2.10%和1.50%。结果表明该方法重复性好。

2.3.3稳定性试验

精密吸取同一便可通片（S1）供试品溶液10μL，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、4、8、12、16、24h进行测定，记录色谱图。以9号峰（芦荟苷）为参照峰，计算16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.02%～0.27%和1.49%～8.14%。芦荟苷、柚皮苷、新橙皮苷和松果菊苷峰面积RSD分别为3.87%、2.50%、2.40%和3.97%。结果表明供试品溶液于24h内测定结果稳定。

2.4指纹图谱研究

2.4.1便可通片指纹图谱的建立

取10批次便可通片样品（S1～S10），精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件依次进样，记录色谱图。采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2004A版）进行数据分析处理，设定S1为参照图谱，其他样品的色谱峰与参照图谱进行自动匹配，生成便可通片指纹图谱，见图1。以峰9为参照峰（S），计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，见表1、2。

声明：本文所用图片、文字来源《中药新药与临床药理》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。

相关链接：决明子，高效液相色谱仪，大黄素