气相色谱-质谱法测定食品中的3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩（二）

3、萃取时间的考察

在含油脂试样(火锅底料)和不含油脂试样(肉昧鲜)中添加0.2mg/kg的ADP标准溶液，含油脂试样以正己烷为萃取溶剂，不含油脂试样以甲醇为萃取溶剂，研究超声萃取5min、10min、15min、20min.30min后的回收率，结果见图3。

从图3可以看出，随着超声萃取时间的增加，回收率结果呈递增趋势，但超声萃取时间超过15min后回收率没有明显的变化，考虑时间成本、检测效率因素，本方法选择超声萃取时间为15min。

3、色谱柱的选择

考察了ADP在HP-5ms、DB-35ms和TG-WaxMS等3种不同极性的色谱柱上的保留情况。结果表明：ADP在HP-5ms和DB-35ms色谱柱上保留较弱且峰形拖尾，而在TG-WAXMS色谱柱上保留较好，且峰形高斯对称。说明该物质适合以聚乙二醇为固定相的极性色谱柱或同类型柱进行分析。

4、进样口温度的选择

实验发现，进样口温度的设定对3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩的峰形和检测灵敏度有显著影响。进样口温度过低，待测物不能够有效的汽化，容易导致待测物被吸附在进样口；而进样口温度过高，容易导致3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩发生高温分解。升高进样口温度有助于提高灵敏度，在合理的范围内(T为200℃～300℃)选择的汽化温度越高，高沸点物质的挥发程度越大，会进入色谱柱造成污染，而且进样口温度过高对色谱柱有一定损害，因此在能满足汽化需要的前提下，尽量选择较低温度，使高沸点物质尽可能的保留在进样口玻璃衬管中，本实验最终选择240℃为最佳进样口温度。

5、方法学考察

（1）标准曲线

本研究采用外标标准曲线，对方法的线性范围进行测定。采用正己烷配制浓度为0.005μg/mL、0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL的3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩标准溶液，按照方法的分析条件，进行气相色谱-质谱分析。以3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩的浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图4)。结果表明，在0.005ug/mL～1μg/mL范围内3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩线性关系良好，符合定量要求。其标准曲线的线性方程为y=9.39x10⁷x-2.44x10⁵，相关系数R2为0.9999。

（2）方法检出限与定量限

在肉味鲜(固态调味料)、火锅底料的空白样品中分别添加0.01mg/kg的ADP标准溶液，采用气相色谱-质谱测定，以3倍信噪比计算方法检出限、以10倍信噪比计算其定量限，得出不同基质中的检出限(LOD)均为0.01mg/kg，定量限(LOQ)均为0.03mg/kg。欧洲食品安全管理局关于ADP在动物饲料中的限量为0.05mg/kg，该方法满足实际检测需求。肉昧鲜空白样品、加标样品(加标量0.01mgkg)及标准溶液(0.05μg/mL)的典型色谱图见图5。

（3）精密度与准确性

在最佳样品提取条件和色谱条件下，对肉味鲜(固态调味料)、火锅底料阴性样品作空白进行加标回收试验。称取空白样品，分别添加3个水平的ADP标准溶液，按照所建立的方法的分析条件进行测定。每份样品进行6次平行测定，考察方法的回收率和精密度。结果表明，不同基质阴性样品中ADP的加标回收率在86.6%～104.6%之间，满足国家标准要求。相对标准偏差（RSD）在0.9%～1.9%之间，实验数据表明本方法重复性好、准确度高。

6、实际样品的测定

准确称取试样5.0g（精确至0.01g)于15mL离心管中，准确加入10mL甲醇，涡旋2min，超声提取15min，4000r/min离心2min，收集上清液。-20℃冰箱冷冻2h，滤纸过滤后供气相色谱-质谱分析。TG-WaxMS毛细管柱(30m×0.25mm×250um)，柱温度程序：50℃保持1min，20℃/min升温至200℃保持3min，25℃/min升温至240℃保持7min；进样口温度：240℃﹔进样模式：不分流；载气：氦气，流速：1mL/min。按以上方法对五种食品基质（香精、调味料、火锅底料、膨化食品、肉制品）总计98批次开展了ADP的检测，结果均未检出ADP，从一定程度上说明该物质并未普遍使用于食品中。

三、结论

针对含油脂食品、不含油脂食品分别建立了有效的前处理方法，利用气相色谱-质谱技术，建立了一种简便高效、高选择性、高灵敏性的检测食品中3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩的方法。

欧洲食品安全管理局关于动物饲料中3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩的限量要求为0.05mg/kg，本方法检出限为0.01mg/kg，定量限0.03mg/kg，灵敏度高，且该方法操作简单快速、精密度高、准确性好，能更准确、高效地监测食品中ADP的使用情况，为食品中ADP的风险监测和风险评估提供了技术支持，避免食品安全事件的发生。

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