改进的QuEChERS-UPLC-MS/MS法测定动物源性食品巾13种全氟化合物（三）

发布时间：2021-05-30 16:14 编辑者：特邀作者周世红

因此，本实验采用AtlantisT3色谱柱，以2.5mmol/L乙酸铵甲醇溶液-2.5mmol/L乙酸铵水溶液进行梯度洗脱。图3可见15种物质在12min内全部流出，日标化合物保留时间适中，峰面积、信噪比较高，杂峰响应较小；在空白基质中添加日标化合物，在上述检测条件下，谱图无干扰杂峰，13种PFCs响应好。随碳链的增加，PFCs在C₁₈柱上的保留逐渐增强，同一碳链数全氟磺酸类化合物保留强于全氟羧酸类化合物。PFBA最先流出，PFDoS最后流出。

2.1.2质谱条件选择

PFCs化学结构中具有羧基或磺酸基，因此采用负离子模式检测。本实验采用流动注射进样方式，分别对5μg/mL标准溶液进行m/z200-1000ESI一级全扫捕，南实验结果发现，PFCs主要以电离后失去羟基上氢原子[M-H]^-最强，确定其为准分子离子，并优化喷雾电压、蒸汽温度、离子传输管温度以获得较强的响应值。接下来，以其作为母离子进行子离子扫描并优化碰撞能量，确定定性离子和定量离子。在实验过程中，PFCAs生成[M-H-44]^-子离子，推断是PFCAs发生中性丢失CO₂产生；PFSAs生成m/z99和m/z80子离子，推断是PFSAs断裂生成[FSO₃]和[SO₃]^-。本次实验选是PFSAs断裂生成[FSO₃]和[SO₃]。本次实验选取丰度较高且干扰较少的子离子[M-H-44]-和[SO₃]^-分别作为PFCAs和PFSAs的定量离子。

2.2前处理优化

针对动物源性食品(肝脏、肾脏、肌肉)基质复杂、含有大量蛋白质及内源性物质等特点，本研究采用改良的QuEChERS样品前处理方法，酸化乙腈提取，C₁₈、PSA和GCB混合吸附剂分散固相蒂取净化，减少基质巾杂质干扰、提高回收率。

2.2.1提取溶剂优化

已报道的文献中采用乙腈、盐酸-乙腈作为提取溶剂提取动物源性食品的肌肉和肝脏基质中的PFCs。鉴于乙腈是常用的动物源性食品有机提取溶剂，而且PFCs是酸性化合物，在酸性环境下呈非解离状态，有利于进入有机相，所以本实验选择盐酸-乙腈作为提取溶剂。

同时，考察了0.05％、0.1％、0.2％、0.3％网个不同浓度盐酸-乙腈对动物源性食品中13种PFCs的提取同收率。图4结果表明，在0.05％～0.3％范同内，9种PFCAs的回收率基本是逐渐增加趋势，4种势，0.1％、0.2％、0.3％盐酸-乙腈的回收率均在合理范围内，分别为76.3％～114.6％、95.3％～119.4％、85.8％～118.9％。上述三个浓度都是适宜的提取浓度，但0.2％盐酸-乙腈的回收率较集中，分布在95％～120％之问，最低回收率95.3％均高于其他两个浓度；同时为避免增加盐酸用量对后续分析产生十扰，所以选择0.2％盐酸-乙腈作为提取溶剂。在提取过程中，0.2％盐酸-乙腈使样品基质中大量蛋白质变性形成沉淀，并通过高速离心去除。但含脂量较高的样品进行蛋白沉淀时，易将样品中的脂肪和水溶性杂质也提取出来，造成提取液混浊，可能对LC-MS/MS分析产生基质干扰，因此对提取液要进一步净化。

2.2.2净化方式优化

QuEChERS方法是使用分散固相苇取技术净化，通过将固相吸附剂直接加入到样品提取液中来达到吸附干扰物质的目的。动物源性食品中存在蛋白质、碳水化合物、色素、脂肪、甾醇等物质，可以通过采用不同类型吸附剂达到净化效果。已有文献选用C₁₈、PSA、GCB三种吸附剂单一或不同配比进行PFCs净化，但存在样品基质种类较少或检测项目少等缺点。本实验比较了3种吸附剂单一和混合方式对动物源性食品的肝脏、肾脏和肌肉中多种PFCs的净化效果及回收率。

2.2.2.1C₁₈优化

C₁₈主要吸附脂肪和酯类等非极性共萃物。通过在空白样品中添加目标物，做2μg/kg添加浓度3个平行，比较40～100mg单一吸附剂C₁₈对PFCs回收率的影响，发现随着C₁₈用量由40mg增加到80mg，同收率亦增加，在80mg达到88.4％～116.3％(见图5)；由80mg增加到100mg，大多数PFCAs回收率基本保持不变，4种PFSAs和PFHpA、PFDA回收率有所下降，但13种PFCs回收率仍处于85.5％～118.0％的合理范围(见图5)。因此采用合理同收率的最小用量80mg。但净化后的溶液有色素残留，会污染色涪柱及检测仪器，需要进一步去除色素。

2.2.2.2PSA优化

PSA是一种弱阴离子交换剂，可以吸附碳水化合物、有机酸、少量色素等极性干扰物质。在空白样品中添加日标物，做2μg/kg添加浓度3个平行，在80mgC₁₈净化基础上，同时加入80～140mgPSA观察PFCs的叫收率变化情况。由图6可以得知随着PSA用量的增加，PFCAs回收率呈先上升后下降趋势，并在100、120mg时回收率达到合理最大值；PFSAs同收率呈下降趋势，80、100mg同收率是83.9％～92.1％。综合考虑，选择100mgPSA为最佳用量。但净化后的溶液有色素残留，需要加入GCB去除。