基于“五原则”结合蛛网模型辨析舒筋活血胶囊中的质量标志物（一）

基于质量标志物筛选的成分传递与溯源、特有性、复方配伍、有效性和可测性五个原则，综合辨析舒筋活血胶囊中的质量标志物。基于“传递与溯源”原则，筛选由原药材传递至复方制剂的化合物；基于特有性原则，筛选复方中的特有性指标成分；基于配伍原则，依据其原药材在复方中的君臣佐使配伍规律归属化合物；基于可测性原则，根据药典和文献，结合含量评价各指标成分的可测性；基于有效性原则，通过网络药理学对舒筋活血胶囊治疗骨质疏松症作用机制研究，作为有效性的评价指标。将上述筛选的化学成分作为候选质量标志物，绘制“蛛网模式”图，按综合得分排序确定该复方的关键质量标志物。基于五原则绘制“蛛网模式”图辨析出羟基红花黄色素A、络石苷、刺五加苷B、α-香附酮、原儿茶酸、原儿茶醛和4-甲氧基水杨醛，作为舒筋活血胶囊的质量标志物。

舒筋活血胶囊（Shujin Huoxue Capsules，SHC）是由红花、香附、香加皮、槲寄生、络石藤等十味中药组成的复方制剂，具有舒筋活络、活血散瘀之功效，临床上用于筋骨疼痛、肢体拘挛、腰背酸痛和跌打损伤等。该产品以现代中医药理论为基础，采用先进生产工艺，作为某中药企业的畅销专利产品，年产值在5000万以上，且市场销售量呈逐年上升趋势。但是，该处方组成复杂，现行的质量标准仅采用薄层色谱法对香附、红花和香加皮进行定性鉴别，HPLC法测定4-甲氧基水杨醛的含量。从质量标准制定的科学性角度分析，舒筋活血胶囊的现行标准仍存在诸多问题，单一指标成分难以表征该复方质量属性的完整性，需要进行合理的标准提升。

由于制药原料的来源不同、配伍不同、工艺不同，使中药复方制剂中的化学成分种类和含量波动较大，从而增加了质量标准建立的复杂性。中药质量标志物（Q-marker）是2016年刘昌孝院士首次提出针对中药产品质量控制的新理念。Q-marker的提出有利于建立质量溯源及全程控制中药质量体系，提高了中药有效性-物质基础-质量控制标志性成分的关联度。Q-marker的重要意义是聚焦中药质量属性的本质特征以及质量评价，以“五原则”统领复方中药质量评价和质量控制：①质量评价体系与有效性的关联和专有性的特点，通过“有效”和“特有”的原则反映；②“配伍环境”能够使质量研究回归和还原到中医药理论和临床作用的本质特点；③以“可测性”的基本原则和研究思路再现中药质量属性的全貌；④以“质量传递与溯源”指导和应用全程质量控制体系的建立。本文基于上述五原则从化学成分传递与追溯、配伍原则、特有性、有效性、可测性五个方面综合辨析舒筋活血胶囊的Q-marker作为新的指标成分。

1仪器与试药

1.1仪器与设备

Agilent Technologies 1260 infinity II高效液相色谱仪，万分之一分析天平(BS124，上海菁海仪器有限公司)，离心机（LD4-2A，北京京立离心机有限公司），超声波清洗机（PS-40A，深圳市深华泰超声清洗设备有限公司），电热恒温水槽（HH-4，常州澳华仪器有限公司），玻璃夹套加热装置(自制)。

Cytoscape3.6.1、整合药理学数据库（http://www.tcmip.cn/TCMSP/index.php）、Genecards（https://www.genecards.org/）数据库、Uniprot（https://www.uniprot.org/）数据库、DAVID（https://david.ncifcrf.gov/）数据库、软件Rsudio1.2.5042、String（https://string-db.org/cgi/input.pl）数据库、WebGestalt（http://www.webgestalt.org/）数据库。

1.2试剂与药材

舒筋活血胶囊由华东药业集团康润药业有限公司提供（批号：180111，中国杭州）。络石苷（批号110820-201607）购自中国食品药品检定研究院，羟基红花黄色素A（批号17082905）、芒柄花黄素（批号17285290）和刺五加苷B（批号18072465）均购自成都曼思特生物科技有限公司。甲醇和乙腈（色谱纯，TEDIA），甲酸、磷酸和乙醇（色谱纯，成都科隆化学试剂有限公司），纯净水（杭州娃哈哈有限公司）。

2方法与结果

2.1基于“传递与溯源”原则辨析SHC潜在的Q-marker

查阅相关文献从10味原料药材中共辨识出560多种化合物。其中袁琴琴等总结出红花药材目前辨识出75个化合物，包括黄酮类、糖类、黄色素、脂肪酸类、酚酸及香豆素类等。根据文献报道，香附发挥药理作用的主要成分为挥发油物质，目前辨识出140多种，主要包括多种单萜、倍半萜及其氧化物；还包括黄酮类、糖类等化合物。狗脊目前辨识出80多种化合物，主要是挥发油类、蕨素类、芳香族类、酚酸类、黄酮类、皂苷类、糖苷类及氨基酸类成分。曹朵等利用柱色谱技术及波谱分析等方法鉴定出槲寄生中9种化合物，包括糖苷类和黄酮苷类等物质。杨雪等根据现有文献总结出香加皮中121种化合物，主要包括54种C21甾体类、5种强心苷类、12种三萜类、12种醛类以及低聚糖、小分子脂肪酸、黄酮等38种其他化合物。贾有梅等通过亲水/反相二维制备液相色谱分离纯化出络石藤中14种化学成分，主要包含木脂素类、黄酮类、三萜类、甾醇类和生物碱类等成分。蔡卓亚等总结出伸筋草中159种化合物，主要类型包括生物碱类、三萜类,少量蒽醌类成分及挥发油等，其中生物碱类46种、三萜类28种、蒽醌类三种及挥发油类81个化合物。泽兰叶的主要化学成分挥发油，郑勇龙等利用气质联用法分析出共48种挥发油类化合物。目前从鸡血藤中分离鉴定出的化学成分约100余种,刘晓艳等分离鉴定出23个黄酮类化合物、1个色原酮类化合物和11个酚酸酯类、1个香豆素类、7个苯丙素类、6个萜类和2生物碱类化合物。

本课题组基于HPLC-QTOF-MS/MS鉴定舒筋活血胶囊的化学成分。通过Scifinder数据库及相关文献检索，建立舒筋活血胶囊中所含化学成分的化学名称、分子式、相对分子质量及一级碎片等信息数据库。利用Peakview软件，根据一级质谱、二级质谱及裂解规律共鉴定了舒筋活血胶囊中27个化合物，主要包括酚酸类、木质素类、黄酮类及苯丙素类化合物。舒筋活血胶囊的(-)ESI-MS和(+)ESI-MS的质谱总离子流图见图1。原药材中含有的化合物有27个可以“传递”到制剂中，具体信息见表1所示。

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