国产新型冠状病毒IgG抗体检测试剂盒的性能比较 （二）

2结果

2.1阳性符合率

分别对确诊的15例新冠肺炎临床阳性样本进行检测，计算每种试剂盒的阳性符合率。结果显示，阳性符合率在90.0%～100.0%的有3种，80.0%～<90.0%的有1种，70.0%～<80.0%的有2种；其中，试剂盒D的阳性符合率最好，为100.0%，试剂盒C和E的阳性符合率均为93.3.%，试剂盒A的阳性符合率为80.0%，试剂盒B和F的阳性符合率最差，均为73.3%，详见表2。

2.2阴性符合率

分别对20例临床阴性样本进行检测，计算每种试剂盒的阴性符合率。结果显示，6种试剂盒的阴性符合率均为100.0%，详见表3。

2.3检出限

采用6种试剂盒测试国家标准物质稀释成的不同梯度溶液，结果为在稀释比1∶16水平检出的试剂盒有1种，在1∶12水平检出的有2种，在1∶8水平检出的有3种，在1∶4和1∶2水平检出的均有5种，原倍6种试剂盒均检出。其中，试剂盒D的检出限最低，试剂盒A、C、E的检出限水平居中，试剂盒F的检出限最高，6种试剂盒的检出限呈梯度分布，详见表4。

3讨论

在新冠肺炎疫情期间，虽然核酸检测在临床诊断中作为“金标准”存在，但新冠病毒感染患者主要表现为下呼吸道感染，且治疗后体内病毒含量逐渐降低，核酸检测受样本采样部位和时间的影响易产生假阴性结果。在核酸检测前需对样本进行病毒灭活处理，也有研究表明，病毒灭活过程对于病毒含量较高的样本检出率无明显影响，但可能会导致病毒含量较低样本的检出率下降，从而产生假阴性结果。目前已有回顾性研究表明，高度疑似新冠病毒感染患者的病毒核酸阳性检出率仅为30%～50%。另外，核酸检测对仪器设备、检测场地和环境条件以及操作人员的要求较高，存在检测时间长、通量低等缺点。而胶体金法抗体检测试剂盒的优势在于采集样本容易、单个样本即可测试、测试时间短、成本低、样本处理和实验操作简单，非常适合基层大批量样本的现场筛查。因此，将胶体法抗体检测试剂盒检测和核酸检测结合使用并联合咽拭子、粪便和血液等多种样本进行检测诊断，对缩短检测窗口期、尽早控制疫情发展非常重要。

鉴于新冠病毒传染性较强，早发现、早报告、早隔离、早治疗对于疾病防控的意义重大。而胶体金法抗体检测试剂盒的检出限与其在低值样本中检出阳性的能力有关，检出限低的试剂盒漏诊率也低。因此，除了阳性符合率和阴性符合率以外，检出限也是评价新冠病毒检测试剂盒的重要指标。当然，这里需要明确的是，试剂盒的检出限指的是由给定测量程序得到的测量值，对于此值，在给定声称物质中存在某成分的误判概率为α时，声称不存在该成分的误判概率为β，与临床的“真阳”不尽相同。

目前，新冠病毒抗体检测试剂盒分为刺突糖蛋白S或核衣壳蛋白N作为包被抗原。S蛋白是病毒感染人体细胞的武器，SARS冠状病毒和新冠病毒都是通过S蛋白结合呼吸道上皮细胞的血管紧张素转化酶2，从而侵入肺组织，导致肺炎。新冠病毒N蛋白与SARS冠状病毒N蛋白具有高度同源性,N蛋白是冠状病毒中产生最早且含量较多的蛋白质，具有很强的免疫原性和特异性，是抗体诊断材料的首选。但是N蛋白抗体基本上在发病10 d才开始大量产生，有研究认为N蛋白抗体作为早期诊断指标可能存在一定的不足。因此，市面上绝大多数抗体检测试剂盒选择重组S蛋白包被检测线。本研究选择的6种国产试剂盒均为抗新冠病毒S蛋白Ig G抗体检测试剂盒。

通过研究结果可知：（1）试剂盒A和B的检出限较低，但阳性符合率分别为80.0%和73.3%，不及检出限居中的试剂盒C和E（阳性符合率均为93.3%）。考虑以下几方面原因：(1)选择的国家标准物质是以新冠病毒重组刺突糖蛋白（S蛋白）为免疫原筛选出的Ig G单克隆抗体进行人源化改造的模拟人血清，当试剂盒选择的特异性识别位点以及肽段长度接近于国家标准物质时，则检出限低；(2)有研究表明，重组蛋白诱导的免疫效率较低，可能与免疫途径相关。同时，选择的蛋白表达系统不同，也会影响试剂盒的阴性符合率、阳性符合率和检出限。(3)定性试剂盒的说明书中对检验方法的操作描述并不规范，比如，虽然样本稀释液都是2滴，但实际这6家生产厂家对2滴样本稀释液的具体体积解释最低的约为60μL，最高的约为100μL，跨度较大，对检出限的检测结果也有影响。

(2）试剂盒D的检出限最低，且阳性符合率为100.0%，阴性符合率也为100.0%。试剂盒D为多点抓取，多种重组蛋白嵌合抗原覆盖的抗原表位比单一重组蛋白要多得多，而检出限最高且阳性符合率为73.3%的试剂盒F则为两点识别。因此，试剂盒D检测临床样本的阳性符合率和阴性符合率都更好。

(3）试剂盒F的检出限最高，且阳性符合率为73.3%，阴性符合率为100.0%，与其他试剂盒相比差异较大。分析除了上面提及的特异性识别位点不同、蛋白表达系统不同、样品稀释液的量值解释不同以外，上样量也是影响检出限检测结果的一个原因。有研究表明，上样量、样品稀释液、反应时间和检测环境均会对胶体金法检测试剂盒的检测结果产生影响。试剂盒F说明书中关于上样量的描述是“吸管1滴”，不同操作者及手法、不同环境条件都会对上样量产生影响，从而影响检测结果。

综上所述，对胶体金试条而言，样本经过试条的时间长短、操作环境以及标记抗体的纯度都会影响金颗粒的聚集以及非特异性结合，进而影响结果判定。为了提高国产新冠病毒抗体检测试剂盒的性能，建议生产厂家从以下几方面优化产品：（1）加大研发投入，优化生产工艺，生产厂家可以同步采用原核和真核表达系统进行新冠肺炎多种病毒蛋白表达，并针对多种蛋白质特异多肽片段进行融合表达，优化组合，筛选出具有较强免疫原性和特异性的蛋白质或设计蛋白联合检测，以提高试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和检出限；（2）做好供应商评价，严格把握出厂检验，生产厂家内部质控盘的设定应尽量贴近临床实际使用情况；（3）通过规范说明书中对操作方法和环境要求的描述来提高试剂盒的稳定性，在操作过程中应严格按照说明书操作。

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