液相色谱-串联质谱法同时检测糕点中31种食品添加剂（一）

发布时间：2021-07-07 09:34 编辑者：特邀作者周世红

糕点是以粮、蛋、油、糖、乳等为主要原料，添加适量辅料，经调制、成型、熟制等工序制作而成。糕点中含有糖类、蛋白质和脂肪，易受到微生物的污染，而且为延长糕点的保质期，商家会过量使用食品添加剂，以增加糕点的货架期。目前添加剂的种类繁多，有增加颜色的，有防腐作用的，有增加甜味的等等，如着色剂，可以增加样品的色泽，如糖精钠，可以增加糕点的甜味，比如山梨酸，能够抑制微生物的生长达到防腐作用，这些添加剂的过量使用，对人体的伤害很大，如糖精钠的过量使用会导致机体一系列不适反应，特别是大剂量使用曾导致严重的中毒事件，毒理学实验证明其具有潜在的动物致癌性。由于我国食品相应法律法规的不健全，一些不良商家通过超范围、超量使用添加剂经常发生，对人们的身体健康造成严重的影响。

糕点中常用的食品添加剂包括防腐剂、甜味剂和着色剂等。为了规范食品添加剂的使用，保障消费者的食品质量安全，我国GB2760—2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对食品添加剂的使用有明确的限量和不得添加都有明确规定。其中，防腐剂中的脱氢乙酸，在糕点中的使用限量为0.5g/kg，但目前脱氢乙酸的超限量使用现象屡有报道；甜味剂中的糖精钠，在糕点中不得使用，但因其甜度高、价格低廉，常被不法商家超范围使用于糕点加工过程。因此，监管部门有必要对糕点中添加剂的使用量进行严格管理和控制。

食品添加剂的检测方法有分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用法、液相-质谱联用法等。分光光度法是利用物质对光的吸收光谱，对物质进行定量或定性的方法，但样品溶液的稳定性、浓度对结果会造成较大的干扰，致使准确度相对不高。气相色谱法适于易挥发并化学性质稳定的物质，但对沸点较高、不挥发的物质则难以进行定量和定性分析，大大缩小了此方法可检测物质的种类。气质联用法是目前测定食品添加剂较常用的方法，但由于部分食品添加剂（防腐剂、甜味剂、着色剂等）本身的不易挥发，在测定过程中需对目标物进行衍生化，使检测过程复杂、灵敏度降低，且基质干扰严重，对其结果造成影响。传统的分析方法是高效液相色谱法，它是目前用于检测食品添加剂中最常用的方法。但由于复杂基质对分析的干扰，高效液相色谱法受到一定的限制，如防腐剂及一些色素会出现假阳性，可通过对照品的PAD光谱与假阳性样品的PAD光谱进行对比确认，但有些样品没有紫外吸收的则无法确认。而液相-质谱联用的适用范围广泛，分析效率高，兼具有定性定量的功能，可有效防止假阳性，消除复杂基质的干扰，灵敏度高并能对多种组分进行快速测定和筛查。因此，鉴于以上情况，建立一种检测方法能同时测定糕点中多种食品添加剂就很有必要，本实验采用液相色谱-串联质谱法，通过优化色谱质谱条件和前处理方法，对甜味剂、色素以及防腐剂在糕点检测中实现同时定性定量的测定，提高检测效率，完善食品检验方法。该方法简便快速、灵敏度高，能在较短时间内同时测定糕点中31种添加剂，满足目标化合物的定性定量的要求。

1材料与方法

1.1主要材料与试剂

糕点样品：均从南宁各超市购入。

试剂：甲醇、乙腈（色谱纯，ThermoFisherScientific公司）；乙酸铵（色谱纯，德国Sigma公司）；聚四氟乙烯滤膜（0.22μm，上海安谱实验科技股份有限公司）；HLB、PRIMEHLB、MCX、MAX、WCX、WAX固相萃取小柱（150mg，6mL，沃特世科技（上海）有限公司）。

根据化合物在质谱上的电离模式，将31种目标化合物分为A、B两组，其中A组化合物为负离子模式有：山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、叔丁基羟基茴香醚、叔丁基对苯二酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸苄酯、对羟基苯甲酸丙酯、日落黄、诱惑红、亮蓝、喹啉黄、酸性橙7、酸性绿50、橙黄G、荧光素钠、酸性蓝3、酸性紫7、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜、糖精钠和酸性红G（标准品纯度均大于90%）Dr.EhrenstorferGmbH，BePure和ANPEL公司；B组化合物为正离子模式有：罗丹明B、碱性橙2、碱性橙21、隐性结晶紫和隐性孔雀石绿蓝（标准品纯度均大于90%）Dr.EhrenstorferGmbH，BePure和ANPEL公司。

ABSCIEXTRIPLEQUAD4500高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪：美国ABSCIEX公司；GradientA10Milli-Q超纯水机：美国Millipore公司；XS205DU电子天平：瑞士梅特勒-托利多公司；MultifugeX3R冷冻离心机：美国ThermoFisher公司；S180H型超声波清洗机：德国Elma公司。

1.2试验方法

1.2.1标准溶液的配制

分别精密称取31种标准品约10.00mg，用甲醇配制成质量浓度约为1.00mg/mL的单标储备液，于4℃冷藏。再分别吸取0.20mL单标储备液置于100mL容量瓶中，加70%甲醇定容至刻度，即浓度为2.00μg/mL的混合标准工作溶液，于4℃冷藏。

1.2.2混合标准曲线溶液的配制

准确吸取0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL的混合标准工作溶液，分别置于10mL容量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，得到质量浓度为20、50、100、200、400、600、800、1000ng/mL的系列标准曲线溶液。

1.2.3样品前处理

准确称量样品1.00g（精确0.001g），置50mL离心管中，加20mL70%甲醇溶液，分2次提取，每次加10mL70%甲醇溶液，超声15min后冷冻离心5min，得到上清液，将2次提取所得上清液合并后定容至20mL。精密量取上清液5mL通过WAX固相萃取小柱（其预处理方法：先经5mL甲醇洗去小柱中的杂质，再用5mL水活化），不收集流出液，先用5mL2%甲酸溶液清洗，再用5%氨化甲醇溶液洗脱并收集在15mL离心管中，在40℃水浴中经氮吹至近干再取出放置至室温，用1mL50%甲醇溶液复溶残渣，用0.22μ滤膜过滤后，待测。