液相色谱-串联质谱法同时检测糕点中31种食品添加剂（三）

2.2.3流动相的优化

本实验中31种添加剂性质具有较大差异，对色谱条件要求极高。为了达到最佳的色谱分离，对乙腈-水、乙腈-乙酸铵水和甲醇-水3种流动相体系进行了考察。甲醇-水体系对于诱惑红等着色剂，存在严重拖尾，峰形较宽和重叠峰等现象，对目标化合物的定量存在干扰；当选用乙腈-水时，大多数目标化合物出峰时间提前，如糖精钠、安赛蜜和柠檬黄的出峰在色谱柱没有保留，同时会受样品基质效应的干扰从而影响样品的定量结果，在检测过程中易受溶剂效应和基质效应的干扰，难以实现定性定量分析；当选用乙腈-乙酸铵水体系，色谱分离度好，质谱响应度高，满足实验室检测分离的要求。

通过考察10mmol/L乙酸铵和20mmol/L乙酸铵两种浓度对目标化合物的影响，并综合目标物的电离、pKa值和加氢方法、色谱分离效果及盐浓度等因素对质谱仪器的影响，最后流动相选择乙腈-10mmol/L乙酸铵，能达到最佳分离效果。31种混合标准品（浓度为100ng/mL）的总离子流图（totalionchromatogram，TIC）见图3。

2.3方法学考察

2.3.1标准曲线和基质效应

基质效应（matrixeffect，ME）是指检测系统在分析样品中分析物以外的组分，对分析物的分析过程有明显的干扰，同时还会对分析结果的准确性有影响，这些干扰和影响通常被称作基质效应。基质抑制效应主要是基质在电离源雾化电离过程中对目标物的雾化电离产生抑制。基质效应可用ME=B/A×100%计算，式中A为标准曲线斜率，B为基质曲线斜率。当ME＜100%时，基质效应是抑制作用；当ME＞100%时，基质效应是增强作用。本实验配制两组标准曲线：曲线A是直接用70%甲醇将混合标准工作液稀释为标准曲线工作溶液；曲线B是用空白糕点样品的提取液做为稀释液，配成标准曲线溶液。由表4可知，在0.02～1μg/mL浓度范围内，两种曲线的线性相关系数均大于0.992。本实验大部分添加剂表现出基质抑制效应，山梨酸、苯甲酸、阿斯巴甜等14种添加剂表现出基质增强效应。一般认为，基质曲线响应值与其标准曲线响应值之比在85%～115%之间不存在明显的基质效应，依此方法可判定，色素类受基质抑制效应明显，如日落黄、亮蓝、橙黄G、喹啉黄、隐性结晶紫、酸性红G。为了消除基质效应的影响，标准曲线溶液使用空白基质提取液配制。

2.3.2加标回收率和相对标准偏差

在阴性糕点样品中添加31种添加剂的混合标准工作溶液，添加水平分别为2.0、4.0、8.0mg/kg，每个水平的样品测定3次，其平均回收率和相对标准偏差（RSD）见表4，各组份的平均回收率为71.3%～103.1%之间，相对标准偏差为0.49%～7.62%，说明该方法准确度高，稳定性好。取最低添加水平2.0mg/kg，上机检测，得到仪器信噪比（S/N），定量限计算公式如下，结果见表4。

2.4实际样品的检测

用所建立的方法对45件购于超市的糕点样品进行检测，实测样品中检出山梨酸阳性样品2个，检出值分别为334mg/kg、84mg/kg，同时与国标方法GB5009.28—2016液相色谱法进行对比，其结果分别为331mg/kg、82mg/kg；三氯蔗糖阳性样品1个，检出值为78mg/kg，同时与国标方法GB/T22255—2008食品中三氯蔗糖的测定方法进行对比，其结果为77.2mg/kg，根据GB2760—2014的要求，对在糕点中使用添加剂的限量规定，本次实测样品含量均低于标准规定的限量要求。

3结论

本研究建立了测定糕点中31种食品添加剂的高效液相色谱-串联质谱的方法。空白样品在2.0、4.0、8.0mg/kg添加水平下的平均回收率在71.3%～103.1%之间，相对标准偏差小于10%。该方法具有简单、快速、准确的特点，可对糕点样品中的目标物进行定性定量分析，满足食品添加剂的国家标准要求。同时，本研究还建立了31种食品添加剂的质谱数据库，为食品添加剂的快速筛查提供依据。

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