北方伟业计量集团有限公司
2 结果与分析
2.1 标准物质的均匀性
随机抽取11个单元的大肠杆菌标准物质进行均匀性评估,见表1。
使用PCA培养基进行测定时,F=0.67,小于查表值F0.05(10,22),其均匀性引入的相对标准不确定度urel(bb)=2.9%。使用VRBA培养基进行测定时,F=1.84,小于查表值F0.05(10,22),其均匀性引入的相对标准不确定度urel(bb)=3.3%。说明标准物质在组内不存在显著性差异,其均匀性良好。
2.2 标准物质的稳定性
根据表2的短期稳定性评估结果,基于PCA培养基和VRBA培养基进行测定,大肠杆菌标准物质可以在–20℃和4℃稳定保存7天。根据表3的长期稳定性评估结果,基于PCA培养基和VRBA培养基进行测定,其可以在–20℃稳定保存6个月。因此,该标准物质建议在–20℃的条件下储存,运输时建议使用干冰。
使用PCA培养基测定时标准物质长期稳定性引入的相对标准不确定度urel(s)=6.0%;使用VRBA培养基测定时标准物质长期稳定性引入的相对标准不确定度urel(s)=5.9%。
2.3 标准物质的定值
标准物质经由6家实验室合作定值,每家实验室分别使用PCA和VRBA培养基进行测定。结果见表4,测量结果经科克伦法检验为等精度,经Grubbs和Dixon法检验未发现异常值,经夏皮洛-威尔克法检验呈正态分布。使用PCA培养基测定时,大肠杆菌标准物质的标准值为7.1×103 CFU/g,A类相对标准不确定度urel(A)=1.7%;使用VRBA培养基测定时,大肠杆菌标准物质的标准值为6.1×103CFU/g,A类相对标准不确定度urel(A)=2.0%。
2.4 定值结果的不确定度评定
大肠杆菌标准物质的不确定度由4部分组成:第1部分是A类相对标准不确定度urel(A),来源于合作定值过程;第2部分是B类相对标准不确定度urel(B),包括天平、移液器、稀释因子带来的不确定度;第3部分是标准物质均匀性引入的相对标准不确定度urel(bb);第4部分是标准物质长期稳定性引入的相对标准不确定度urel(s)。将这4部分相对标准不确定度合成后计算得到标准值的合成相对不确定度urel(C),及扩展不确定度U(k=2,置信概率95%)。结果(表5)表明,大肠杆菌标准物质基于PCA培养基的标准值为(7.1±1.1)×103 CFU/g,基于VRBA培养基的标准值为(6.1±1.0)×103 CFU/g。因此,本研究成功研制出具有2种特性量值的大肠杆菌标准物质。
2.5 不同品牌PCA培养基和VRBA培养基的生长率
使用标准物质法,对5个品牌PCA培养基和VRBA培养基的生长率进行评价。结果如表6所示,待测PCA培养基的生长率均满足PR≥0.84的要求,待测VRBA培养基的生长率均满足PR≥0.83的要求,且PCA培养基和VRBA培养基的评价结果和国标方法的评价结果有很好的相关性。该标准物质可以同时用于PCA培养基和VRBA培养基生长率的评价。
3 结束语
本研究尝试提出了一种新的微生物标准物质研制思路,即使用多种培养基研制具有多种特性量值的标准物质,并且研制出具有两种特性量值的大肠杆菌标准物质。研制过程中同时使用PCA培养基和VRBA培养基进行均匀性和稳定性评估及多家实验室合作定值。该标准物质均匀性和稳定性良好,基于PCA培养基的标准值为(7.1±1.1)×103 CFU/g,基于VRBA培养基的标准值为(6.1±1.0)×103 CFU/g。
GB 4789.28—2013及相关标准中,大肠杆菌标准菌株可以用于非选择性分离和计数固体培养基(TSA、PCA、营养琼脂)以及选择性分离和计数固体培养基(VRBA、VRBA-MUG、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂)的生长率评价。本研究仅选取了一种非选择性培养基PCA和一种选择性培养基VRBA作为切入点,进行大肠杆菌标准物质的研制。研制的标准物质可以同时用于PCA培养基和VRBA培养基的生长率评价,具有方便快捷的优点。在今后的工作中,项目组将逐步拓展该标准物质适用的培养基范围,从而提高微生物研究机构、检测机构以及培养基生产厂家的质量控制效率。
声明:本文所用图片、文字来源《中国测试》2020年10月,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系删除
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