北方伟业计量集团有限公司
| 传代方法 | 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签； 1.取细菌培养液1-5ml，10,000rpm(11,500×g)离心1min，尽量吸净上清； 2.向菌体沉淀中加入200μL缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮。注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入110μL缓冲液（20mM Tris,pH8.0；2mM Na2-EDTA；1.2%Triton），和70μL溶菌酶溶液（50mg/mL，客户自备，目录号：RT401），37℃处理30min以上。如果需要去除RNA，可加入4μL RNase A（100mg/mL）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15sec，室温放置5min； 3.向管中加入20μL Proteinase K溶液，混匀； 4.加入220μL缓冲液GB，振荡15sec，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯； 5.加220μL无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠； 6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中； 7.向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中； 8.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中； 9.重复操作步骤8； 10.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验； 11.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12,000rpm(13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2min，12,000rpm(13,400×g)离心2min； |
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蜡状芽孢杆菌基因组DNA
(Genomic DNA from Bacillus cereus)
BNCC369921
两歧双歧杆菌基因组DNA
(Genomic DNA from Bifidobacterium bifidum)
BNCC369924
粪肠球菌基因组DNA
(Genomic DNA from Enterococcus faecalis)
BNCC372743
阴道范妮黑塞氏菌基因组DNA
(Genomic DNA from Fannyhessea vaginae)
BNCC362764
双路普雷沃氏菌基因组DNA
(Genomic DNA from Prevotella bivia)
BNCC362765
需血斯尼思氏菌基因组DNA
(Genomic DNA from Sneathia sanguinegens)
BNCC362766
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