R.oryzaeMG1发酵对姜油树脂抗氧化活性的影响（二）

2、姜油树脂添加量对R.oryzaeMG1生物量和发酵液pH的影响

在20mLPDA液体培养基中分别添加姜油树脂0μL、100uL.200μL、400uL、800uL，接入1%的R.oryzaeMG1孢子悬液，28℃震荡(150/min)培养72h，每8h取样，测定培养物pH及菌丝湿重，绘制的生长量曲线和pH曲线如图2、3所示。

由图2可见，随着姜油树脂添加量的增加，R.oryzaeMG1生长速率及细胞量逐渐递减，说明姜油树脂有一定的抑菌作用。在不添加姜油树脂的情况下，R.oryzaeMG1在接种后16h进入对数期，且持续增长，72h后菌丝湿重8.72g；当姜油树脂添加量为50μL时，MG1生长趋势与不添加姜油树脂时相近，但生长速率稍缓，在接种后24h为对数期，细胞量有所降低，72h后菌丝湿重8.22g；当姜油树脂添加量为100uL时，生长速率明显缓慢，约32h后才进入对数期，72h后菌丝湿重降为3.71g；当姜油树脂添加量超过200μL时，MG1生长极缓慢，细胞量明显降低，72h后菌丝湿重小于1.70g。上述分析表明，在0～100μL姜油树脂添加量范围内，对R.oryzaeMG1的生长繁殖影响不大，当添加量超过100μL时，表现出极强的抑菌能力。

由图3可见，随着姜油树脂添加量的增加，培养物的pH持续上升；不添加姜油树脂的情况下，经72h发酵，pH为2.81；随姜油树脂添加量的梯度，pH分别为2.77、2.96、3.13、3.43、3.62。上述分析表明，在0～100μL姜油树脂添加量范围内，MG1的代谢未受到明显抑制，产酸能力较强，与图2的分析相吻合。

由图4可见，当液体培养基中不添加姜油树脂时，MG1生长状况良好，菌丝抱团，菌丝球大小均匀，培养液澄清；在姜油树脂添加量在50～200uL时，菌丝一部分抱团，另一部分呈絮状，培养液澄清；在姜油树脂添加量达到400～800uL时，菌丝完全呈絮状，培养液较混浊。说明R.oryzaeMG1对姜油树脂的耐受能力约在100uL以内，与图2、3的分析相吻合，而且絮状的菌丝形态更有利于产酶，以此为基础，进行后续姜油树脂添加量单因素试验。

3、R.oryzaeMG1发酵姜油树脂条件的单因素试验

（1）姜油树脂添加量对抗氧化活性的影响

在20mLPDA液体培养基中分别添加姜油树脂10μL、20μL、30μuL、40μuL、50μL、60uL、70μL、80μL、90μL、100μL、120μL、140μL、160uL、180μL、200μL，接入1%的MG1孢子悬液，35℃震荡(150r/min)培养4d后姜油树脂的抗氧化活性见图5。

由图5可见，在10～70μL姜油树脂添加量范围内，发酵后姜油树脂TAC逐渐增加，当姜油树脂添加量为70uL时，TAC为1964.67±6.09umol/g；当添加量大于70μL后，TAC逐渐降低，说明R.oryzaeMG1的生长受到抑制，生长代谢减缓，导致发酵后姜油树脂的总抗氧化活性降低。因此选取70μL姜油添加量进行后续试验。

（2）发酵温度对抗氧化活性的影响

在20mLPDA液体培养基中添加70μL姜油树脂，接种后在不同温度下震荡培养4d后姜油树脂的抗氧化活性见图6。

由图6可见，姜油树脂乳添加量为70uL，在20～35℃下发酵4d后，姜油树脂的TAC逐渐升高。当温度为35℃时，TAC为1980.13±8.60μmol/g；当温度高于35℃后，TAC逐渐降低，说明R.oryzaeMG1生长代谢受到影响，发酵力降低，导致发酵后姜油树脂的总抗氧化活性降低。因此发酵温度35℃进行后续试验。

（3）发酵时间对抗氧化活性的影响

在20mLPDA液体培养基中添加70uL姜油树脂，接种后35℃培养不同时间，每天取样测定抗氧化活性见图7。

如图7可见，姜油树脂乳添加量为70μL，在35℃下发酵1～4d后，姜油树脂的TAC逐渐增加，在发酵4d时，TAC为2003.9土5.45umol/g；当发酵时间超过4d后，TAC变化差异不显著，说明随MG1生长进入稳定期，发酵力趋于平稳，导致发酵后姜油树脂的总抗氧化活性与之前无显著性差异。因此，选择发酵时间4d进行后续试验。

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