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图5为β-胡萝卜素几何异构体的C30-HPLC-ELSD色谱图。
据惠伯棣等人的报道,在被测得类胡萝卜素物质浓度较低时,ELSD检测器的信号与其量间存在线性关系。当样品中全反式β-胡萝卜素浓度在5.6~32.5mg/mL范围内时,其量与ELSD上的组分峰面积呈现良好的线性关系(见图6)。
记录不同浓度的13-顺式异构体、9-顺式异构体和全反式异构体样品在PDA和ELSD上的峰面积。二者之间显示出正线性关系(见图7~图9)。
以全反式异构体吸光系数为基准,根据以上公式,可估算出顺式异构体的吸光系数(见表1)。
图10为盐藻提取物软胶囊内容物的C30-HPLC-PDA色谱图。根据其色谱行为和光谱特征可对其中各β-胡萝卜素几何异构体组分进行定性。
由于β-胡萝卜素顺式异构体参比样品的缺乏,在一般的检测中只能根据其色谱的峰面积进行测定。其结果见图11(a)。这样做是以各组分的吸光系数相同为前提的。由于各β-胡萝卜素顺式异构体的吸光系数不同于全反式异构体的吸光系数。根据各组分色谱的峰面积,经过吸光系数的换算,所得结果见图11(b)。显然,图11(b)所示结果更真实地反映了盐藻软胶囊内容物中β-胡萝卜素几何异构体组成。
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