烟曲毒震颤素

烟曲霉震颤素主要是由烟曲霉产生的一类有毒代谢产物。1971年国外有人分离出了8株烟曲霉，并从其产毒培养物中分离出两种对小鼠具有震颤毒性的代谢产物，经纯化鉴定后，命名为烟曲霉震颤素A及烟曲霉震颤素B(简称FTA，FTB)。

通过质谱、红外光谱、核磁共振及X射线衍射等手段，山崎、COle和Eickman等先后确定了FTA、FTB和FTC等的化学结构和空间立体结构(如图11—5所示)。FTA的分子式为C₃₂H₄₁N₃0₇，FTB的分子式为C₂₇H₃₃N₃0₅。

一、污染来源与分布

烟曲霉广泛分布在世界各地的土壤中，尤以稻田、菜地土样中检出率高，极有可能污染粮食、蔬菜、饲料、畜禽舍、垫草等。在40ºC以上繁殖力很强，对人畜的健康造成潜在威胁。烟曲霉系中有6个种，在大米、玉米、小麦和燕麦等食品中烟曲霉检出较多，在烟曲霉系中可形成子囊孢子的有费氏曲霉系。费氏曲霉广泛分布于土壤中，可引起水果腐烂。常常能在干燥的饲料中分离出费氏曲霉。费氏曲霉能产生震颤毒素，包括FTA、FTB、FTC、疣孢青霉原和TR-2等。费氏曲霉同其他真菌相比高度耐热，在10～52℃条件下均可生长，最适生长温度26～45℃，是引起果汁和经热处理的水果制品腐败的主要耐热菌之一。

国内有人在研究烟曲霉及其同源菌属产生FTA、FTB能力时发现，104株烟曲霉中，仅有3株能产生FTA，而且产毒量只有0.9～11.6mg／kg培养物；有98株能产生FTB，含量可达4.8～3052．0mg／kg培养物。从日本22个县采集的1147份土壤样品中，共有673份(占59％)分离出烟曲霉，其中稻田和菜地土样中烟曲霉检出率较高，分别为69％～100％和36％～100％，森林地带为5%～74％，草地、牧场为5％～82％，果园为23％～100%。将其中90株烟曲霉进行产毒培养实验，89株可产生FTB，只有1株产生FTA。

二、毒性与危害

烟曲霉震颤素对大鼠、小鼠、家兔、猪、羊等中枢神经系统有较强毒性，可引起动物的强烈痉挛乃至死亡。在我国曾发现与此菌有关的、有痉挛症状的鸡烟曲霉中毒。

烟曲霉震颤素A对小白鼠的LD₅₀腹腔注射为5mg／kg体重，静脉注射为18μg／kg体重。随着剂量的增加和时间的延长，实验动物出现震颤、阵发性惊厥、体位呈袋鼠样、强直性肌肉痉挛乃至死亡，其间伴有眼球震颤和缩瞳，脑电图无明显改变，有些神经性药物如抗惊厥剂等可以减轻上述症状或延缓症状出现的时间。

震颤毒素被认为与串珠霉症、燕麦草蹒跚症和伐木工人病等有关。燕麦草蹒跚症是指放牧的马、牛、羊和鹿等家畜大量摄取燕麦草之后出现剧烈的神经系统紊乱症状，包括震颤、共济失调、对外界刺激高度敏感、强直性痉挛等，轻者可恢复，重者可导致死亡。伐木工人病是大量摄入高浓度气源性孢子后引起的人类过敏性肺炎，急性症状包括发烧、颤抖、咳嗽、呼吸困难，一般在接触后4～8h发病，24h后恢复。反复接触可导致慢性症状，如进行性呼吸困难和肺纤维化。

三、烟曲霉震颤素的检测

1、色谱条件

色谱工作站：BIO-RADMODEL 700色谱工作站，配备BIO-RADMODEL 1706型UV／VIS可调检测器。

检测波长：UV225nm。

色谱柱： BIO-RADBIO-SILODS-5SC₁₈反相色谱柱(4mm×250mm)或BECKMANSpherisorb ODSC_l8反相色谱柱(4.6mmx 250mm)。

流动相：流动相为10%的甲醇-水和90％的甲醇-水。

样品提取液：三氯甲烷。

2、样品处理

三氯甲烷振荡提取样品1h后，取少量提取液过0.45gm滤膜后直接进样。

3、洗脱条件

0～1min，10％的甲醇-水100％从2.0mL／min梯度降至0.5mL／min；1～12min，10％的甲醇-水流动相0.5mL／min；12～14min，10％的甲醇-水100％0.5mL／min梯度转至90％的甲醇一水100％1.0mL／min；维持6min后，在2min内流动相由90％的甲醇-水100 %1．0mL／min梯度转至10%的甲醇-水100％2.0mL／min，在此条件下再维持10min后进下一样品。

4、FTB标准曲线的测定

将FTB用甲醇稀释成不同浓度后进样，根据进样量和峰面积绘制标准曲线。

5、回收率测定

取粉碎的玉米样品(每份5g)置三角瓶中，分别加入FTB标准品，使成100pg/g、500pg/g、1000pg/g、1000pg/g和20000pg/g等浓度，样品与标准品混匀后在室温条件下自然晾干24h，然后每瓶加入三氯甲烷50mL，振荡提取1h，直接取少量提取液过0.45μm滤膜后进样20～50μL，在UV225nm处检测。根据FTB标准曲线计算样品中的FTB含量。

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