国产新型冠状病毒IgG抗体检测试剂盒的性能比较 （一）

目的：探讨不同国产新型冠状病毒（以下简称“新冠病毒”）IgG抗体检测试剂盒（胶体金法）的阳性符合率、阴性符合率及检出限的差异。方法：选择具有代表性的6种国产新冠病毒IgG抗体检测试剂盒，严格按照其说明书，对15例临床确诊的阳性灭活样本进行阳性符合率测试。并通过20例同期健康体检者阴性灭活样本和国家标准物质（稀释成不同梯度）比较6种试剂盒的阴性符合率及检出限。分析影响试剂盒检测结果阳性符合率、阴性符合率及检出限的因素。结果：6种试剂盒中，阳性符合率在90.0%～100.0%的有3种，在80.0%～<90.0%的有1种，在70.0%～<80.0%的有2种；6种试剂盒的阴性符合率均为100.0%;6种试剂盒的检出限呈梯度分布。结论：试剂盒的特异性识别位点、蛋白表达系统以及说明书的规范程度等因素都会影响试剂盒的检测结果。

0引言

新型冠状病毒肺炎（以下简称“新冠肺炎”）疫情自发生以来在全国迅速蔓延，严重威胁人民的生命安全和身体健康。面对新冠肺炎疫情，只有做到早发现、早诊断、早治疗，才能进一步控制疾病的传播。目前，临床诊断新冠肺炎主要采用病毒核酸检测，但由于该方法受到操作环境、仪器设备和操作人员等因素的限制，血清学检测越来越引起人们的重视。目前，基于抗体的诊断指标已经被归入《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第7版）》，以实现对核酸检测的有效补充，这大大提升了新冠肺炎早期确诊的准确率，可为后期临床治疗进行辅助判定。截至2020年7月，在国家药品监督管理局网站可查到的取得注册证的新型冠状病毒（以下简称“新冠病毒”）检测试剂盒为44种，其中抗体检测试剂盒21种，占47.7%；核酸检测试剂盒23种，占52.3%；新冠病毒免疫类试剂盒中胶体金法抗体检测试剂盒取得注册证的为7种，占15.9%；无抗原检测试剂盒获批。胶体金法抗体检测试剂盒凭借其耗时较短、成本低、不易受到环境限制且操作简便快捷等优点在此次疫情防控中发挥了重要作用，但特异性差、阳性检出率低、阴性样本易出现假阳性结果、检出限高是这类试剂盒的主要问题。本研究选择具有代表性的6种国产IgG抗体检测试剂盒（胶体金法），测试15例阳性样本，比较其阳性符合率，并通过20例阴性样本和国家标准物质来比较试剂盒阴性符合率和检出限。

1材料与方法

1.1样本及标准物质

根据国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第七版）》中确诊病例判断标准，选择感染1周后的阳性灭活样本15例以及同期健康体检者阴性灭活血清样本20例。

采用新冠病毒刺突糖蛋白（S蛋白）人源IgG单克隆抗体溶液标准物质，标准物质编号：GBW(E)091109。使用标准物质说明书中推荐的0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液（phosphatebuffersaline,PBS)(pH=7.4）将标准物质分别按照1∶2、1∶4、1∶8、1∶12、1∶16的比例稀释，加上原倍液，共6个水平。本研究采用的标准物质是以新冠病毒重组刺突糖蛋白（S蛋白）为免疫原筛选出的IgG单克隆抗体进行人源化改造的模拟人血清。而6种试剂盒均为定性检测，未规定检出限。因此用不同梯度稀释国家标准物质测试检出限时，不对具体浓度进行关注，只横向比较稀释度。

1.2试剂及仪器

新冠病毒IgG抗体检测试剂盒分别来自于A、B、C、D、E、F6个国内生产厂家。检测原理：在胶体金试条的检测线位置包被重组新冠病毒抗原（S蛋白），当样本中含有新冠病毒IgG抗体时，检测线处的抗原与其结合，同时，该抗体与被胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体结合，则在检测线处形成肉眼可见的条带。当质控线处和检测线处均显示条带时，则判为阳性；当质控线处显示条带，而检测线处无条带时，则判为阴性。

所需仪器和设备为生物安全柜、移液器（德国Eppendorf公司，规格为2～20μL）。

1.3方法

1.3.1试剂盒检测方法

应严格按照试剂盒说明书的要求操作，注意说明书中对环境条件的要求。具体操作过程见表1,6个生产厂家说明书中对检测条件的要求基本相同，其中有1个厂家没有明确上样量。

1.3.2阳性符合率

按照试剂盒说明书进行操作，分别取6种检测试剂盒测试15例灭活的临床阳性样本，每个样本检测1次。

1.3.3阴性符合率

按照试剂盒说明书进行操作，分别取6种检测试剂盒测试20例灭活的临床阴性样本，每个样本检测1次。

1.3.4检出限

按照试剂盒说明书进行操作，分别取6种检测试剂盒测试国家标准物质稀释液，每个水平检测3次，共6个水平。

1.4数据分析

计算试剂盒的阳性符合率和阴性符合率，对照检出限结果，比较6种试剂盒之间的差异。

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