气相色谱法测定吴茱萸中3种挥发性成分（一）

吴茱萸为芸香科植物、石虎或疏毛吴茱萸的干燥近成熟果实，气芳香浓郁，味辛辣而苦，具有清热止痛、降逆止呕的功效，用于治疗肝胃虚寒、阴浊上逆所致的头痛或胃痛等症状，并能治疗消化不良、湿疹、神经性皮炎及口腔溃疡等多种疾病，对心血管及免疫系统也具有一定的药效。吴茱萸中含有挥发油、生物碱、柠檬苦素类、氨基酸类以及黄酮类等多种有效成分。吴茱萸挥发性成分是其药效物质基础的一部分，具有抑菌杀菌、平喘、抑制麦角胺对α-受体的阻断等作用，其中α-蒎烯对白色念珠菌具有明显的抑菌和杀菌作用；柠檬烯具有抗肿瘤、抗炎症、抗氧化、抗菌抑菌、祛痰平喘、利胆溶石等多种功效；罗勒烯不仅能提高植物对食草类昆虫及某些病原菌的抗性，还对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有一定的抑制作用。现有文献多是对吴茱萸挥发性成分进行分离鉴定，而缺少对其中主要成分含量的测定研究，导致吴茱萸质量控制缺少保障。在吴茱萸挥发性成分分离鉴定的基础上，笔者建立气相色谱法对吴茱萸中罗勒烯、柠檬烯、α-蒎烯3种挥发性成分进行含量测定，并通过聚类分析比较了4个产地9批吴茱萸药材样品中3种挥发性成分的含量差异，为吴茱萸的全面质量控制提供科学依据。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：7890B型，美国安捷伦科技有限公司。集热式搅拌器：DF–101S型，金坛市科析仪器有限公司。调温加热套：DRT–TW型，郑州科泰实验设备有限公司。电子分析天平：TB–215D型，感量为0.01mg，丹佛仪器北京有限公司。α-蒎烯、柠檬烯、罗勒烯对照品：纯度（质量分数）均大于95%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。乙酸乙酯：色谱纯，批号为20160513，国药集团化学试剂有限公司。无水硫酸钠：分析纯，批号为11528044，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。吴茱萸：收集于不同产地，如江西、陕西、贵州、浙江等。实验用水为纯水。

1.2 溶液的制备

1.2.1 对照品溶液与混合标准工作溶液

分别称取α-蒎烯50mg、柠檬烯1500mg及罗勒烯250mg，置于同一50mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容，摇匀，得混合对照品储备溶液。分别移取不同体积的混合对照品储备溶液于一组10mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至标线，摇匀，得到一系列不同质量浓度的混合标准工作溶液，于4℃条件下保存，待测。

1.2.2 供试品溶液

按照2020版《中国药典》（4部）中挥发油测定法（甲法）提取挥发油。称取吴茱萸50g，置于2000mL圆底烧瓶中，加入10倍量水浸泡12h，挥发油提取器蒸馏水上部精密加入3mL乙酸乙酯，加热保持微沸状态6h，冷却至室温后，取乙酸乙酯层于10mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容，加入1g无水Na2SO4脱水，用微孔滤膜过滤，即得。

1.3 仪器工作条件

1.3.1 挥发油成分鉴定

（1）色谱条件。色谱柱：DB–5柱(30m×0.25mm×0.25μm，美国安捷伦科技有限公司)；升温程序：0～2min保持温度为60℃，2～29.5min以8℃/min的速率升至280℃，保持5min；进样口温度：260℃；分流比：10∶1；载气：氦气，流量为1.2mL/min；进样体积：1μL。

（2）质谱条件。离子源：EI源；扫描时间：3.5min；载气：甲烷，流量为1.0mL/min；四级杆温度：280℃；离子源温度：300℃；质量范围：60～600Da。

1.3.2 3种挥发性成分含量测定

色谱柱：HP–5弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm，0.25μm，美国安捷伦科技有限公司)；检测器：FID；升温程序：0～5min，保持60℃，5～15min，以4℃/min的速率升至100℃；进样口温度：250℃；检测器温度：310℃；分流比：20∶1；载气：高纯氮气，流量为1mL/min；尾吹气流量：45mL/min；进样体积：1μL。

2 结果与讨论

2.1 提取方法选择

挥发油的提取方法有水蒸气蒸馏法（SD）、索氏提取法（SE)、超临界流体萃取法（SFE)、微波辅助萃取法（MAE)等。水蒸气蒸馏法具有操作简单、装置简易、提取率高等优点，是一种提取挥发油的常用方法。2020版《中国药典》通则中收载了两种测定方法，甲法适用于测定相对密度小于1.0的挥发油；乙法适用于测定相对密度大于1.0的挥发油。吴茱萸挥发油相对密度在1.0以下，因此选择水蒸气蒸馏法提取吴茱萸药材中的挥发油，为完善吴茱萸药材的质量标准提供参考。

2.2 挥发油成分鉴定

取适量供试品溶液，按照1.3.1气相色谱–质谱（GC–MS）条件进样测定，通过NIST标准谱库检索进一步确认化合物，吴茱萸挥发油共鉴定出33种化合物，主要为萜类、烯醇类、酯类等物质，其中含量较高的物质为α-蒎烯、柠檬烯、罗勒烯、水芹醛、丁香酚、4-异丙基苯甲醇、石竹烯、芳樟醇、五烯酸。吴茱萸挥发油中化学成分GC–MS法分析结果见表1所示。

相关链接：吴茱萸，芳樟醇，柠檬烯，乙酸乙酯

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