应用二乙酰一肟分光光度法准确测定牛乳中尿素的含量（二）

（3）反应时间的选择。取8支比色管，加入标准溶液后分别置于沸水浴中，按照6min、8min、10min、12min、14min、16min、18min、20min的反应时间，考察最后吸光值的变化情况，结果见图3。

由图3可知，在6－13min，溶液的颜色较浅，显色不完全，吸光度也较小，随着水浴时间的延长，尿素显色反应吸光值呈逐渐上升趋势，增加较明显；在14－18min，溶液的吸光度比较稳定，可显色完全，吸光值基本达到最大值。为了提高效率，沸水浴时间定为14min。

（4）标准曲线的建立。取8支25mL具塞比色管，分别加入100mg/L的尿素标准使用液0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL。在上述各管中分别加入2.0mL二乙酰一肟溶液，再加入三氯化铁－氨基硫脲－硫酸混合试剂10.0mL，混匀后用纯水稀释至25mL。分别配制成0mg/L、2mg/L、4mg/L、8mg/L、16mg/L、24mg/L、32mg/L、40mg/L的尿素标准系列，相当于
每个管中相当标准物质的质量为0.00mg、0.05mg、0.10mg、0.20mg、0.40mg、0.60mg、0.80mg、
1.00mg。将上述各管在沸水浴中加热14min，置流动自来水中冷却2min。以纯水作参比，用1cm比色
皿，在525nm处测定各管吸光度值，以尿素含量对吸光度做回归分析。根据最佳实验条件，对尿素标准溶液进行吸光度的检测，得到不同浓度的尿素和吸光度的关系标准曲线，进而得到标准曲线的方程为：y＝0.7629x＋0.0331，相关系数：r＝0.9992。详见表1和图4。

（5）精密度测定。对同一种乳样的尿素含量平行测样9次，先由绘制的标准曲线查得样品管中尿素的质量，再由下述公式计算得出结果，如表2所示。

由表2可以看出，该方法精密度较好，其相对标准偏差小于2.0％。

（6）乳样中尿素回收率的测定。取同一品牌乳样3份，其中1份作为本底样处理，另外2份添加不同浓度的尿素标准溶液，混匀静置。同时对3份样品前处理后，再按上述实验方法进行测定。根据如下公式来计算样品回收率，结果如表3所示。

由表3可知，该方法的回收率较好，低浓度和高浓度加标回收均达到97％。

4.乳样中尿素含量的测定结果。根据最佳实验条件，按照实验方法对12种不同品牌牛乳中尿素的含量进行测定，结果如表4所示。

三、讨论
利用二乙酰一肟分光光度法来测定牛乳中尿素的含量，该方法标准曲线线性相关r＝0.9992，检出限为0.020mg/L，样品测定的精密度为RSD＝1.9％（n＝9），低浓度和高浓度加标回收均达到97％。该方法
操作简单快速，可以很好地应用于日常对牛乳中尿素含量的检测。运用该法对超市及农贸市场销售的12种不同袋装奶及散装奶中尿素含量进行检测，结果发现，尿素含量最低的是10#样品（159mg/L），含量最高为11#样品（645mg/L），大部分测定结果在200－400mg/L左右。杜彦山、张志国等人曾测得牛奶中尿素含量为224.7mg/L，和本实验中的几个数据较为接近，但5#、9#、11#样品的尿素含量远远高于300mg/L，很有可能是掺假牛乳。

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