褐变黑枸杞抗氧化作用的研究（二）

（8）果蝇抗氧化基因mRNA表达水平的测定

取-80⁰C保存的果蝇，Trizol法提取mRNA，反转录得cDNA，-80⁰C备用。Realtime-PCR法检测测定SOD1、SOD2、CAT、MTHmRNA表达水平。果蝇抗氧化基因实时定量PCR引物见表1。

3、数据处理

本实验采用IBMSPSSStatistics22软件进行数据统计与分析。其中，两两比较时采用单因素方差分析，多重比较时采用Duncans多重检验。实验结果以“均值士标准偏差（M±SD）”表示。P＜0.05表示两组之间存在显著性差异，P＜0.01表示两组之间存在极显著性差异。

二、结果与分析

1、褐变黑枸杞中总黄酮、总酚含量和褐变指数酚类、黄酮类和蛋白黑素被认为是主要的生物活性化合物，在食品中具有抗氧化性能。据报道，这些抗氧化化合物具有很强的自由基清除能力，对自由基诱导的疾病有重要作用。由表3可知，红枸杞和褐变黑枸杞中的酚类浓度为0.890±0.008mgGAE/mL和1.303±0.001mgGAE/mL。红枸杞和褐变黑枸杞中黄酮类化合物的含量分别为1.588±0.225mgRE/mL和2.300±0.256mgRE/mL。与红枸杞相比，褐变黑枸杞总酚和总黄酮含量显著性增加（P＜0.05）。结果表明，高温高湿处理可导致美拉德反应过程中总酚和总黄酮的增加。

从表3可以看出，黑素类化合物在褐变黑枸杞中的褐变指数（420nm）为1.857+0.006。褐变黑枸杞的褐变指数明显高于红枸杞（P＜0.05）。研究表明，美拉德反应能产生高分子量的黑素。

2、褐变黑枸杞中主要的酚类物质

由表4可知，高效液相色谱检测了7种酚类化合物，主要包括儿茶素、咖啡酸、P-香豆酸、芦丁、阿魏酸、槲皮素、绿原酸。其中对香豆酸浓度为8.76±0.81mg/g，其次为儿茶素水合物（5.67+0.21mg/g），这两种化合物具有抗氧化活性，对氧化损伤具有保护作用。与褐变黑枸杞相比，红枸杞中各酚类含量低于褐变黑枸杞。结果表明，P-香豆酸是褐变黑枸杞中酚类化合物的主要成分。

3、褐变黑枸杞对果蝇寿命的影响

由图1和表5可知，与正常组相比，饲喂枸杞后，各剂量组果蝇的平均寿命、最高寿命及半数死亡时间均有明显的延长，说明枸杞有一定的抗氧化作用，对果蝇寿命有一定的延长作用。其中，与红枸杞低剂量组相比，12mg/mL褐变黑枸杞组雄、雌性果蝇的平均寿命及最高寿命均显著延长（P＜0.05），说明褐变黑枸杞可以有效延长果蝇的寿命，延缓果蝇衰老，且呈现良好的剂量效应关系。

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