劲骨胶囊功效成分鉴别及其盐酸氨基葡萄糖含量测定（三）

（3）茚三酮显色法

取胶囊内容物200mg，加水10mL溶解，过滤，取滤液5mL，于10mL具塞试管中，作为样品溶液；取盐酸氨基葡萄糖对照品25mg，于10mL具塞试管中，加水5mL溶解，制成对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物200mg，与样品同法制成阴性样品溶液的方法实验后观察，样品和对照品溶液为蓝紫色，阴性样品则无此反应，如图4所示。

（4）薄层色谱法

取胶囊内容物50mg于分液漏斗中，加水10mL溶解，加石油醚（30～60⁰C）20mL，振摇，静置分层，取下层液过滤，作为样品溶液；取盐酸氨基葡萄糖对照品10mg，加水5mL溶解，作为对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物50mg，与样品同法制成阴性样品溶液的方法实验后观察，整个薄层色谱图层次分明，斑点清晰可见，样品和对照品只有一个斑点，位置在一条线上，R_f值一致，均显相同深红色斑点，阴性样品不显色，如图5所示。

该项研究与现有的国家药品标准GB/T20365-2006在样品提取、展开剂和显色方式上作了较大改进。因为药品是化学纯品，可以用水直接提取，展开剂为甲醇-浓氨水=（9:1，V:V），展开，晾干后喷以茚三酮显色剂。而劲骨胶囊是多种原料混合物，若按此法分离显色效果较差，背景棕黑色，斑点模糊不清。本法样品先用石油醚脱脂和除去脂溶性色素，以正丁醇-乙醇-冰醋酸-水=（4:1:1:2，V:V:V:V）为展开剂，茚三酮显色剂溶解在展开剂中，展开与显色同时进行，远比喷洒显色要均匀，便于操作，背景白色，斑点深红色，反差大，图谱更清晰。

这些鉴别方法都从不同角度证明样品中真实存在盐酸氨基葡萄糖。同时所有方法的阴性样品都不显色，说明这些方法专属性强。

2、薄层色谱法鉴别白芍提取物

取胶囊内容物2g，加乙醇40mL，超声提取20min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加水20mL溶解，加水饱和正丁醇溶液振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为样品溶液；取白芍对照提取物1g，加乙醇30mL，与样品同法制成对照提取物溶液；取白芍对照药材0.5g，加乙醇10mL，与样品同法制成对照药材溶液；取芍药苷对照品适量，加乙醇制成1mg/mL溶液，作为对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含白芍及白芍提取物胶囊内容物2g，与样品同法制成阴性样品溶液。的方法实验后观察，样品色谱中，在与白芍对照提取物，白芍对照药材，芍药苷对照品相应位置上显相同颜色的蓝紫色斑点，Rf值一致，阴性样品不显色，如图6所示。

国内外关于白芍及白芍提取物报道较少，Yan等用HPLC、LC-MS等方法测定白芍中芍药苷等化学成分，而不是白芍提取物的鉴别。中国药典一部有鉴别白芍单味药材的薄层色谱法，实验中仅设计芍药苷1个对照物。但由于本研究样品是多种原料混合物，之间相互干扰，如直接应用，无法分离。参考相关文献，采用水饱和正丁醇萃取，除去样品中干扰物质，可使芍药苷得到了很好分离。结果显示，样品与对照组的芍药苷斑点位置、颜色均保持一致，这比单一对照品鉴别方法更加可信。

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