多管发酵法测定生活饮用水中总大肠菌群不确定度的评定工（一）

大肠菌群是用来评价食品卫生状况的指标。为了确保检验结果可信，试将测量不确定度的评定结果引入到生活饮用水中总大肠菌群测定能力验证考核工作中。

不确定度评定是表示被测量值的分散性与测量结果相关性的参数，是判断测量结果质量的重要依据，也是反映检验过程中各因素对检验结果不确定度的影响程度，任何检验（测）结果都不可避免因误差而导致测定值的不确定度，国际标准ISOdEC17025中明确规定检测报告必须有检测结果不确定度数据及说明，尤其检测结果处于临界值时，必须出具包含不确定度的检测报告。通过对检测数据不确定度评估，可以分析出检测过程中哪些因素是重点关注的问题，以便提高检测能力，保证数据准确。
本文分析多管发酵法测定生活饮用水中总大肠菌群过程中引入不确定度的来源，比较各分量不确定度所占的比例，计算生活饮用水中总大肠菌群测定结果合成不确定度和扩散不确定度，从而定量描述生活饮用水中总大肠菌群测定结果的不确定度。为类似大肠菌群测定结果不确定度的评定提供参考。

一、材料与方法

1、试验材料

生活饮用水：吉林省质量技术监督局提供，螺旋管装冻干粉，用加冰袋的密封盒取回实验室。

2、仪器与试剂

SW-CJ无菌操作台：中国苏州安泰空气技术有限公司；PRESOCLAVE-Ⅱ高压灭菌器：西班牙SELECTA；DHP-9162恒温培养箱：太仓市科教器材厂；ABl35-S电子天平（±0.01g）：瑞士梅特勒-托利多公司。

3、试验方法

从4⁰C冰箱取出装有冻干粉的螺旋管，于室温下放置15min复温。无菌操作向螺旋管中加入10mL0.85％无菌生理盐水溶液进行复溶，盖好瓶盖，室温下静置2min。使用均质器充分混悬螺旋管中的内容物，静置30s以消除产生的泡沫。把菌液吸入无菌瓶中，再向螺旋管中加入10mL0.85％无菌生理盐水冲洗螺旋管，把洗液液吸入无菌瓶中；重复上述冲洗螺旋管过程5次。总稀释液50mL0.85％无菌生理盐水（复溶10mL0.85％无菌生理盐水+总稀释液50mL0.85％无菌生理盐水），振荡混匀，做为原倍（100）样品。

依据GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标（多管发酵法）》进行检验。

4、不确定度的主要来源

检验结果不确定度的主要来源见图1。

二、各不确定度分量的评定

1、样品制备引入的不确定度评定

能力验证过程中，样品制备是决定测定结果准确性的关键因素。本实验样品制备过程中主要由10mL刻度吸管分6次将样品逐步洗出。JJG196-2006规定，10mL刻度吸管允许误差为±0.05mL。均属于B类评定，按矩形分布计算不确定度。因此，10mL刻度吸管引入的不确定度μ_{（10mL刻度吸管）}为：

2、样品稀释引入的不确定度评定

样品稀释过程不确定度来源主要是10mL刻度吸管和1mL移液器。JJG196-2006规定，10mL刻度吸管允许误差为±0．05mL。JJG646—2006移液器检定规程规定1000μL移液器吸取1mL时允许误差为±1.0％，均属于B类评定，按矩形分布计算不确定度。因此，10mL刻度吸管和1nlL移液器引入的不确定度μ_{（10mL刻度吸管）}和μ_{（1mL移液器）}分别为：

10mL刻度吸管和1mL移液器引入的相对不确定度μ_{（10mL刻度吸管）}和μ_{（1mL移液器）}分别为：

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