陈皮抗油脂氧化活性成分研究（五）

3、单体化合物的结构鉴定结果与分析

陈皮乙酸乙酯提取物经柱层析分为三个极性洗脱物，其中石油醚：乙酸乙酯=1∶1的洗脱物和乙酸乙酯洗脱物经制备薄层层析法各得到三个主要化合物，而抗氧化作用较强且含量较高的化合物1为淡黄色结晶状粉末，熔点为151.7℃～153.4℃，高效液相色谱图(HPLC图，见图7)结果显示其纯度较好。
 

该化合物的红外光谱图(IR图，见图8)显示其母体结构为黄酮。

该化合物的高分辨质谱(HR—MS图，见图9)显示其[M+H]+为373.1262。

该化合物的核磁共振谱(NMR图)见图10，其中a图为核磁共振氢谱图，b图为核磁共振碳谱图。从图10中的a图可以看出该化合物中共有20个氢原子，其中化学位移值为7.92、7.90、7.05、7.04处各有1个氢，为苯环上的氢；化学位移值为6.60处有1个氢，为双键上的氢；化学位移值为4.08、3.99、3.91、3.87、3.86处各有3个氢，为甲氧基上的氢。从b图可以看出该化合物共有20个碳原子，化学位移值为164.27、1 63.72、1 53.28、149.35、149.1 3、145.60、139.65、129.04(3C)、124.51、115.67(3C)、115.40、62.64、62.59、62.20、62.15、56.06。
 

质谱结合核磁共振谱可以看出该化合物的分子式应为C20H20O7，经过与文献对照，可以确定该化合物为5，6，7，8，4’-五甲氧基黄酮，结构见图11。
 

三、结论

目前抗氧化实验中，多数文献是先提取再分离，然后测试活性，这种研究过程实验量大、周期长、所耗试剂多、针对性较差，实验效果不明显。本研究以清除DPPH自由基活性实验、亚油酸过氧化抑制实验、卵黄脂蛋白脂质过氧化抑制实验和大豆油氧化抑制实验作为抗氧化模型，递进筛选活性部位，逐步缩小活性范围，得到陈皮中抗油脂氧化作用较好的单体化合物。结果表明陈皮乙酸乙酯提取物和无水乙醇提取物对DPPH清除作用较显著，且清除率与浓度呈量效关系；将这两种提取物分别经柱层析分为三个洗脱部分后，由乙酸乙酯提取物所得到的三个部分对DPPH自由基的清除作用较强，并且对亚油酸过氧化具有抑制作用；这两种洗脱物经制备薄层层析法各得到三个主要化合物，由洗脱物1所得到的2个化合物及洗脱物3所得到的1个化合物对亚油酸过氧化抑制作用比其它化合物强，并且对卵黄脂蛋白脂质过氧化具有抑制作用；该化合物对DPPH、亚油酸过氧化、卵黄脂质过氧化及食用油氧化均表现出较显著的抑制效果，并与浓度呈较好的量效关系，当浓度为2.00mg／mL时，对DPPH自由基的清除率为72.36％，对亚油酸过氧化的抑制率为56.12％，对卵黄脂蛋白过氧化的清除率为49.21％，对大豆油氧化的抑制率为42.54％。该化合物经IR、NMR和MS等仪器分析方法鉴定为5，6，7，8，4’-五甲氧基黄酮。该化合物具有较好的抗油脂氧化活性，有望作为食品抗氧化剂应用于油脂工业中。将抗氧化活性较好的单体化合物添加到油脂中，不仅可以延缓油脂氧化，还可以提高油脂的营养价值，在人体内发挥多种生理功能，降低疾病风险，具有非常广阔的应用前景。

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