高效液相色谱法同时测定奶味饮料中的香兰素和乙基香兰素（二）

3结果与分析

3.1检测波长的选择

如图1香兰素和乙基香兰素的吸收光谱所示,两者最大吸收峰均为233、279、308 nm,但由于在233 nm处,很多有机化合物均会存在吸收,因此会出现大量吸收峰的干扰,因此,233 nm不作为两者定量检测优选波长。

分别使用279 nm和308 nm作为检测波长进行了100μg/mL香兰素和乙基香兰素的混合标准工作液测定,如图2所示,采用308 nm作为检测波长时,相对于279 nm作为检测波长,目标峰峰形对称性好,信噪比高。

使用无添加纯牛奶作为空白样本,添加2μg/mL混合样本,分别使用279 nm和308 nm作为检测波长进行检测。检测液相色谱图如图3所示,采用308 nm作为检测波长时具有更好的峰形和更高的信噪比。

综合香兰素和乙基香兰素的化学性质,以及对标准混合工作液和试剂样本的检测的表现,采用308 nm作为检测波长时,方法的检测信号更强、干扰更低、信噪比更高,检测性能更优。因此后期检测选择308 nm作为检测波长。

3.2前处理条件优化

实验证明在酸性条件下,香兰素和乙基香兰素以游离酸的形式存在,使用含有5%的乙酸的乙腈溶液作为前处理溶液,能够极大程度的保证香兰素和乙基香兰素释放于溶液中,而且酸性条件下能充分的将样本中脂肪及蛋白固化,通过离心的方式即可将脂肪与蛋白除去,将上清液过滤后进样,发现几乎无杂质影响检测。

将离心后上清液使用正己烷进一步脱脂后进样与简化前处理操作后直接进样比较,发现正己烷处理前后,待测物峰面积一致,说明简化的前处理方式能够完全去除样本中脂肪的干扰,故实验采取简化前处理方式。

3.3方法的线性范围及检出限

将系列混合标准工作液进样后,将峰面积Y(A)为纵坐标,以标准品浓度X(μg/mL)为横坐标,进行线性回归如图4所示。在0.1~100μg/mL浓度范围内,香兰素的线性回归方程为Y=38.51X+1.15,r2=0.9999;香兰素的线性回归方程为Y=31.94X+0.75,r2=0.9999。表明2者的线性关系良好。

以3 S/N作为最低检出限,测得香兰素和乙基香兰素的检出限均为0.02μg/mL。

3.4回收率及精密度实验

取空白样本18份,每份2 mL,每6份为一组,在1、5、20µg/mL 3个水平下进行香兰素和乙基香兰素混合加标回收实验,测定结果见表1。如表1所示,香兰素和乙基香兰素的加标回收率分别为97.0%~101.1%和96.0%~100.5%,相对标准偏差均小于5%。说明建立的高效液相色谱法同时测定奶味饮料中的香兰素和乙基香兰素的方法回收率和精密度良好,具有可靠的检测性能。

3.5实际样品测定

应用优化好的方法进行了奶味饮料中香兰素和乙基香兰素的含量测定,色谱图5所示。香兰素及乙基香兰素均呈现出良好的吸收峰,且无干扰及拖尾峰存在,说明建立的联合检测的方法性能良好。

对市售的10种奶味饮料成品以及10种外卖购买奶茶样品进行了香兰素和乙基香兰素含量的测定,检出情况如表2所示。检测结果表明市面上奶味饮料中很多产品含有一定含量的奶味增加剂香兰素和乙基香兰素,对市场奶味饮料的质量监管具有一定的指导意义。

4结论

本研究建立了一种利用高效液相色谱法同时测定奶味饮料中的香兰素和乙基香兰素的检测方法,结合香兰素和乙基香兰素的吸收光谱、空白样本添加法检测和实际样本检测结果,最优的选择308 nm作为检测波长;优化了样本的前处理方式,简化了实验条件,通过含有5%乙酸的乙腈溶液进行样本中香兰素和乙基香兰素的提取,有效的提取了目标分析物,提高了检测效率;香兰素和乙基香兰素在0.1~100μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,以3S/N作为最低检出限,方法的检出限均为0.02μg/mL;方法的加标回收率分别为97.0%~101.1%和96.0%~100.5%,相对标准偏差均小于5%,说明建立的高效液相色谱法同时测定奶味饮料中的香兰素和乙基香兰素的方法回收率和精密度良好,具有可靠的检测性能。

实验表明,新建立的方法检测效率极大提升、回收率及精密度高、可推广性强,对市场奶味饮料中的奶味增加剂的监管和检测具有重要的意义。

声明：本文所用图片、文字来源《食品安全质量检测学报》2020年9月，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系

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