饲料及食品添加剂中三聚氰胺的 高效液相色谱-质谱法检测（一）

近年来，食品安全问题是社会各界关注的焦点，随着人民生活水平的提高，对食品安全提出更高的要求。农畜产品质量安全是农村经济工作、农业生产的重点和难点。作为食品安全源头的农畜产品，频繁出现质量安全问题，如三聚氰胺、猪链球菌病、苏丹红等，危害人民群众的身体健康。三聚氰胺是一种有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺甲醛树脂，在纺织、造纸、造纸、木材、电气等行业广泛应用。食品和饲料中添加三聚氰胺没有任何营养价值，并且会产生危害。因此，三聚氰胺已被禁止添加于饲料和食品中。加强对饲料及食品添加剂中三聚氰胺的检测，对保障饲料及食品安全有重要意义。本文采取高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS），对饲料及食品添加剂中的三聚氰胺进行检测，获得良好的效果。

普通蛋白质含氮量只有16%，但三聚氰胺含氮量可达66.7%，为提高饲料中蛋白质的含氮量，部分非法分子将三聚氰胺添加到饲料和食品中。动物长期摄入含三聚氰胺的饲料，会产生很大的毒性作用。动物会不仅出现肾衰竭而死亡，而且会危害人体健康。我国明令禁止在任何饲料中添加以三聚氰胺等为原料的“蛋白精”。检测三聚氰酸的常用方法有GC-MS/MS法、LC-MS/MS法、HPLC法等。目前只有农业行业有对饲料中三聚氰胺残留的标准，国家标准尚没有。GC-MS法、HPLC法是农业行业标准中的规定方法。GC-MS法的前处理比较繁琐，需衍生化。饲料及食品添加剂中有复杂的基质成分，存在许多干扰因素，影响检测结果。本文优化质谱条件，应用高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS），为从源头控制饲料及食品安全提供保障。

1材料与方法

1.1仪器与试剂

三聚氰胺分析纯，不低于99.5%的纯度。称取10 mg三聚氰胺，使用10mL容量瓶，设置三聚氰胺标准溶液，作为标准储备液，用流动相定容。分析纯为甲酸、乙醇。使用仪器为安捷伦1100LC-Trap-XCT系统。

1.2处理样品

在批发市场购买饲料与食品样品。粉碎样品，将5 g样品放入具塞锥形瓶中。加入20 mL体积比1∶1的水-乙醇溶液，含体积分数0.1%的甲酸。10 min超声波振荡，然后过滤，使用20 mL上述提取液再次提取残渣。过滤，合并滤液。定容至5 mL。使用氮吹仪上浓缩，使用滤膜0.45μm过滤。

1.3检测条件

质谱条件：扫描范围为m/z44-150。4.0×105 Pa的雾化器压力，97.4 V的毛细管出口电压，3909 V的毛细管电压，正离子化模式的电喷雾电离，9 L/min的干燥气流量，0.5V的碎裂电压，350℃的干燥气温度。

色谱条件：体积比5∶95，流动相为乙腈-0.1%甲酸。色谱柱Kromasil-C18柱，5μm，4.6 mm×250 mm，进样量5μL，0.4 mL/min的流速。

2结果

2.1优化质谱条件

三聚氰胺一级质谱：取三聚氰胺标准溶液，50 mg/L。向电喷雾质谱注入。方式为流动注射。母离子全扫描，选取负离子模式、正离子模式，进行比较分析。相比负离子峰强度，正离子模式更高，相差3个数量级。获得三聚氰胺的准分子离子很强，采取检测正离子模式，m/z127。
三聚氰胺的二级质谱：选取条件，碎裂电压0.2～2.0 V；毛细管出口电压50～300V；Skimmer电压15～100 V。电喷雾电压1500～4500 V。优化质谱条件，二级质谱为以m/z127为母离子。获得所需理想质谱条件。碎片离子丰度比2∶1。主要碎片离子m/z85和109。进行定性确证，定量为提取的离子质量色谱峰面积，包括m/z 127、109、85离子。

2.2选择色谱分离条件

甲醇-水作三聚氰胺的流动相，作为一种强极性化合物，三聚氰胺的胺基有许多。在C18柱上基本没有保留，很难分离三聚氰胺与溶剂，几乎同时流出三聚氰胺与溶剂。添加甲酸在流动相中，为改善分离，使用甲酸为离子对试剂。加入甲酸可以提升灵敏度，促进三聚氰胺分子离子化。为获取稳定的保留时间，使用250 mm的柱子。

声明：本文所用图片、文字来源《中国饲料》2020年第18期，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系

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