血清药物化学结合网络药理学探讨养心氏片治疗冠心病的物质基础与 作用机制（二）

2结果

2.1 YXST入血成分的鉴别

根据前期对YXST化学成分定性分析的结果，本研究对YXST灌胃给药前后的大鼠血浆进行比对分析，通过提取母离子、比较保留时间和质谱裂解规律，同时结合文献和对照品信息，对YXST的入血成分进行了鉴别。给药前后大鼠血浆在正负离子模式下的总离子流图见图1，从中共定性鉴别出26个原型成分，分别为葛根素、甘草苷、丹酚酸B、灵芝酸A、黄连碱、药根碱等，具体信息见表1。

2.2靶点收集与YXST治疗冠心病潜在靶点的筛选

通过检索STITCH、TCMSP和Binding DB数据库，收集得到19个入血成分对应的655个靶点，合并后共得287个成分靶点。根据TTD、DrugBank、PharmGKB、MalaCards和CTD数据库，合并去重后共获得199个冠心病相关的疾病靶点。并不是所有的入血成分靶点都能发挥特定药效。因此，首先将287个成分靶点与199个疾病靶点进行关联，筛选得到42个重叠的靶点，即为YXST治疗冠心病的直接作用靶点，结果见图2。此外，为进一步分析与疾病靶点存在间接作用的成分靶点，把成分靶点与疾病靶点导入STRING数据库进行PPI分析，将获得的数据利用Cytoscape进行可视化。其中，成分靶点与疾病靶点不能直接或间接与彼此相互作用的节点被去除。再利用Network Analyzer插件对该PPI网络中所有节点的degree值进行分析，计算得平均degree为18.33。筛选degree大于平均degree 2倍的节点作为hub node，共有54个节点符合标准。在这些hub node中，有40个是成分靶点，26个是疾病靶点，除去两者重叠的12个靶点，剩下的28个成分靶点即为YXST治疗冠心病的间接作用靶点，结果见图2。将42个直接靶点与28个间接靶点合并即得YXST治疗冠心病的潜在靶点。70个潜在靶点信息见图2。

2.3功能注释及通路分析

对YXST治疗冠心病的潜在靶点进行GO功能注释分析，结果见图3。70个潜在靶点主要富集于胞外刺激反应、氧化应激反应、炎症反应的调节、活性氧代谢过程的正调控、药物反应等生物过程(biological process，BP)；主要涉及膜筏、膜区、囊腔、内质网内腔、血浆脂蛋白颗粒等细胞组分(cellular component，CC)；主要影响MAP激酶活性、信号转导-丝氨酸/苏氨酸激酶活性、核心启动子序列特异性DNA结合、血红素结合、受体调节活性、细胞因子受体结合等分子功能(molecular function，MF)。进一步对潜在靶点进行KEGG通路富集分析发现，YXST治疗冠心病主要涉及晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体(advanced glycationend products-receptor foradvanced glycationend products，AGE-RAGE)、动脉粥样硬化、TNF、IL-17、C型凝集素受体、Th17细胞分化、Toll样受体等信号通路，结果见图4。

2.4网络的构建及分析

YXST“入血成分-潜在靶点”网络共包含86个节点，矩形表示入血成分有16个，圆形表示潜在靶点有70个；边共有191条，表示化合物和靶点之间的联系，结果见图5。利用Network Analyzer插件对网络的拓扑性质进行分析，以节点度、介数中心度和紧密中心度为标准对入血成分和潜在靶点分别进行筛选，详细信息见表2。3项数值均在平均值以上的关键化合物有3个，为大豆苷、小檗碱、葛根素。3项数值均在平均值以上的关键靶点有16个，为PTGS2、PTGS1、NOS2、ESR1、NOS3、HSP90AA1、ADRB2、ESR2、MAPK14、CASP3、JUN、PPARG、AKT1、TNF、MAPK3、MAPK1。这些成分和靶点很有可能是YXST治疗冠心病的药效物质和作用靶点。

声明：本文所用图片、文字来源《中国现代应用药学》2020年8月，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系

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