重组漆酶降解黄曲霉毒素B1分子对接分析及产物结构解析（三）

3、各因素对AFB₁降解率的影响

由图5A可以看出，漆酶与AFB₁孵育时，当孵育时间在12～24h内，降解率逐渐升高，时间大于24h，降解率趋于稳定为90.33%；由图5B可以看出，在25～30℃范围内，AFB₁降解率基本保持不变，在35℃达到为大值77.45%，当温度在35～40℃范围内，降解率降低，当温度大于40℃时，略微升高，与大多数真菌漆酶一样，LAC₃是一种相当耐温的酶，但是耐热性是关于曝光时间的函数，当温度高于40℃，该酶在此条件暴露12h后可能导致失活较快，活性降低；由图5℃可以看出，在实验条件范围内，毒素的降解率随漆酶酶活力的增加而逐渐升高，当酶活力达到3U时，AFB₁的降解率达到峰值74.87%，继续加大酶量，降解率基本不在增长。

4、响应面法优化漆酶降解AFB1条件

在单因素试验基础上，选择孵育时间（A）、孵育温度（B）、酶活力（C），以AFB1的降解率（Y）为响应值，其中-1、0、1分别代表低、中、高3个水平，试验设计与结果见表3。将数据结果进行多元回归分析，得到回归方程:

Y=-504.54600+8.95888A+22.91040B+3.40289C--0.10758AB-0.00550AC-0.037775BC-0.16133A²-0.26762B²-0.012395C²

由表4可知，模型P值小于0.0001，表明该模型极显著，失拟项P值大于0.05，表明失拟项验证不显著，说明回归方程可靠可以用于AFB₁最高降解率条件的预测。A和B对AFB₁的降解影响极显著，A2和C2对AFB₁的降解影响显薯，表明孵育时间、孵育温度和酶活力对AFB₁的降解有显著的影响，影响程度从大到小为孵育时间＞孵育温度＞酶活力。

5、AFB₁降解条件的响应面分析

从图6a可以看出，孵育温度对应的响应值的曲线陡峭，表明对AFB₁降解率影响较大，而孵育时间对应的响应值的曲线相对平缓，表明孵育时间对AFB₁降解率的影响不大，孵育时间和孵育温度的等高线扁平，表明孵育温度和孵育时间的交互作用对AFB₁降解率的影响较大；

从图6b可以看出，酶活力对应的响应值的曲线陡峭，说明对AFB₁的降解率影响较大，而孵育时间对应的响应值曲线相对平缓，表明孵育时间对AFB₁降解率的影响不大，酶活力和孵育时间的等高线近似圆形，表明酶活力和孵育时间的交互作用对AFB₁降解率的影响较小；从图6c可以看出，酶活力对应的响应值曲线相对较陡，而孵育温度对应的响应值曲线较平缓，表明酶活力对AFB₁降解率影响较大，酶活力和孵育温度的等高线扁平，表明酶活力和孵育温度的交互作用对AFB₁降解率的影响较大。

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