黑附球菌YP1分泌物的广谱抗霉菌活性和化学成分多样性分析（二）

另以不掺分泌物的PDA平板为对照，通过分泌物掺入和菌饼接种培养，观察不同霉菌在PDA平板上的生长情况（图1），测量并计算掺入分泌物对霉菌平板生长的抑制效果（表1）。
 

由表1和图1可以清楚地看出，YP1外分泌物对各种供试霉菌具有非常显著的抑制效果，对酵母也有很好的抑制效果，其中白地霉的生物学特征介于普通霉菌和酵母菌之间，繁殖方式为裂殖，形成节孢子，酿酒酵母为芽殖，不形成孢子。由表1可知，霉菌在添加分泌物的PDA平板上菌落生长受到显著抑制，可以肯定的一个原因是孢子萌发受到了抑制，因为霉菌主要依靠形形色色的孢子进行繁殖扩张，孢子数量庞大，孢子萌发受到抑制，自然会大大抑制其菌落生长速度，但霉菌的菌丝生长是否也受到了分泌物的抑制，尚无法判定。

为搞清楚真菌的菌丝生长是否受到分泌物的抑制，我们又对一些植物病原真菌和食用菌进行了平板培养。这些真菌有个共同特点，即其菌丝生长和孢子形成时间间隔明显，只有菌丝体生长到一定阶段才会有孢子的形成，尤其是食用菌，在平板培养条件下只有菌丝体营养生长，无法形成孢子，平板培养的结果见表2。表2清楚地表明，产孢越早越多的真菌菌落生长受到分泌物的抑制越严重，产孢越晚越少的真菌菌落生长受到分泌物的抑制越轻微，而在平板培养中不形成孢子的食用菌菌落的生长不受分泌物的影响。以上表明，YP1外分泌物对真菌菌丝的生长没有影响，分泌物抑制真菌生长是通过抑制孢子萌发实现的。

5、拮抗菌株

YP1外分泌物的化学组成分析经高压液相色谱分离和质谱仪分析，共分离获得10种组份（图2），其中鉴定出3种组份，未鉴定出的组份有7种（表3）。鉴定出的三个组份均为由C、H、N、O组成的富N有机化合物（分子中含7～8个N原子），未鉴定出的7种化合物很可能属于新化合物。

黑附球菌本身是一种腐生真菌，广泛存在于空气、土壤及植物体表面，黑附球菌不同菌株之间存在着强烈的多样性，这种多样性不仅体现在不同的菌株分离物表型的多样性上，还体现在不同的菌株可以产生不同种类的次生代谢产物，在工业、医药和生物控制领域具有很大的应用潜力。然而，迄今报道的由黑附球菌菌株产生的广谱抗真菌物质仅有黄柄曲菌素，其他菌株产生的抗菌化合物都只能对少数种类的真菌产生拮抗作用，比如Ferdinand等（2013）从可可树中分离的一株内生Epicoccum菌株发酵液产生三种聚氧聚酮化合物，epicolactone和epicoccolideA与B，由C、H、O三种元素组成，对终极腐霉、螺壳状丝囊霉、立枯丝核菌三种植物病原真菌的菌丝体生长具有显著的抑制效果。

三、讨论

本研究中获得的YP1菌株外分泌物具有显著的抗霉菌活性，同时对多孢子植物病原真菌也具有很好的拮抗效果，其抑制多孢子真菌的主要机制是抑制孢子萌发，在果蔬、食品的保鲜防腐以及植物病害的防治领域显示出很好的应用潜力。YP1菌株外分泌物由多达10种化学成分组成，再一次证实了黑附球菌个体菌株之间存在着强烈的代谢多样性，是目前发现的次生代谢产物最为丰富的真菌种类之一，是难得的微生物天然产物资源，在工业、医药和生物控制领域具有很大的应用潜力，成为相关研究的热点。本项目组下一步的重点研究工作是对YP1菌株外分泌物各组分的化学结构进行精确解析，并进一步优化发酵条件，提高分泌物发酵产量，为实际应用奠定基础。

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