高效液相色谱法测定鲜虾中4-己基间苯二酚残留量的不确定度分析（一）

4-己基间苯二酚(4-HR)作为一种能够抑制褐变的新型抗氧化剂，能有效防止产品在储存过程中由于多酚氧化酶的催化而产生氧化褐变或色泽变黑，因此在水产品保存中得到广泛应用，特别在蛋白质丰富，极易褐变腐败的鲜虾保存中发挥着不可替代的作用。我国强制性国家标准GB2760-2014中明确规定鲜水产(仅限虾类)中4-HR最大残留量不得超过1mg/kg。但有些生产商或供应商为了达到保鲜、护色的目的而在鲜虾中过量添加4-HR，极易造成其残留量超过限量的lmg/kg的规定。从而对人体产生一定的危害。目前4-HR测定还没有统一的国家标准，仅有一个地方标准和一个行业标准。主要检测技术有气相法、液相法、气质法、液质法，但关于4-HR测定的不确定度还尚未见报道。

测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相关联的参数，它能对检测数据进行客观真实的评价，给出测量结果的可信程度。当检测结果在限量值附近时，实验室出具的检测报告将直接影响到样品合格与否的判定，因此开展测量不确定度的分析与评定对确保测量结果的准确性与可靠性具有十分重要的意义。本文依据DB33/3007-2015《食品安全地方标准食品中4-己基间苯二酚残留量的测定》，对测量结果的不确定度进行全面系统的评定，筛选出不确定度贡献率较大的主要因素，在实验中加以重视和改进，为实验室质量控制(如产品质量临界值时的判定)提供可靠依据，同时为检测其他产品中4-HR残留量的不确定度提供参考，评定方法参照JJFll35-2015《化学分析测量不确定度评定》和JJFl059.1-2012《测量不确定度评定与表示》。

一、材料和方法

1、试剂和材料

4-己基问苯二酚标准物质(纯度为97％)：TRC公司；乙腈为色谱纯；二氯甲烷、甲醇、丙酮和正己烷均为分析纯。

2、主要仪器设备

Agilent1260Infinity高效液相色谱仪；电子天平：丹纳和赫西特传感工业有限公司；离心机：Thenno公司；旋涡混合仪：IKE公司；旋转蒸发仪：BUCHI公司；固相萃取装置：安谱公司；氮气吹干仪：Biotage公司；高速组织捣碎机：睿科公司。

3、检测方法

（1）样品前处理

根据DB33/3007-2015《食品中4-己基间苯二酚残留量的测定》的要求：从原始样品中取出代表性的样品500g，去头、去壳、去附肢，取可食部分。用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份分别装入到洁净容器中作为试样，密封并标识。将试样放入-18℃以下保存。称取59(精确到0.01g)样品置于50mL离心管中，加入10mL乙腈二氯甲烷溶液(体积比：7:3)，高速组织捣碎机匀浆2min，盖塞，旋涡混匀lmin，超声提取10min，8500r/min离心5min，取上清液转入100mL旋转蒸发瓶中，重复上述操作一次。合并提取液于45℃旋发近干，取7.5mL二氯甲烷分三次超声溶解，合并，待净化。将上述待净化液转至固相萃取柱中。用6mL正己烷淋洗，将固相萃取小柱抽至近干，用6mL甲醇丙酮溶液(体积比：1:1)洗脱，收集洗脱液。洗脱液于50℃氮气吹干，残留物用1.0mL流动相溶解，过0.22μm的有机相为空滤膜，供液相色谱测定。

（2）标准溶液的配制

标准储备液：准确称取0.1030g4-己基间苯二酚标准品(纯度为97％)，用乙腈水溶液(体积比：6:4)溶解并定容至100mL，浓度为1mg/mL。

（3）色谱条件

色谱柱：C18(5μm，4.6×250mm)；柱温：35℃；流动相：乙腈-水(6+4)；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；荧光检测器：激发波长：280nm，发射波长：310nm。

（4）数学模型

X：试样中4-己基间苯二酚的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

C：试样溶液中4-己基间苯二酚的含量，单位为微克每毫升(μg/mL)；

V：试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；

m：试样质量，单位为克(g)。

二、结果与分析

1、不确定结果的来源与分析

从数学模型和分析过程影响因素可知，试样中4-己基间苯二酚测定结果的不确定度的主要来源于待测物浓度(C)、试样称量(m)、试样定容(V)、测量重复性、方法的回收率。

2、不确定度分量的评定

（1）待测物浓度(C)引入的不确定度

C的不确定度由标准系列溶液的配制和曲线拟合两部分组成。标准系列溶液配制又分为储备液的配制、以及标准曲线溶液的配制两个过程。

①储备液配制过程产生的不确定度u(c一1)。

标准品纯度引入的不确定度：4-己基间苯二酚标准样品的纯度为≥97％，为B类评定，不确定度为a/k。依据经验为等概率地落在区间内，即均匀分布。

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