同步荧光法测定蔬菜中维生素E含量

维生素E作为一种天然抗氧化剂，具有清除体内自由基、维持细胞膜的完整和正常功能以及防止脂质过氧化等生理功能，蔬菜是人体摄取维生素E的主要来源，测定蔬菜中维生素E的含量，对于评价它的营养品质具有重要意义。

测定维生素E的方法主要有比色法、薄层法、荧光法、气相法、高效液相色谱法等，比色法操作比较简单，但灵敏度较低;高效液相色谱法分辨率高，但操作复杂，成本高，对于大批量样品测定比较困难;荧光法特异性强，干扰少，灵敏，快速，简便，对于测定大批量蔬菜中的维生素E是一种比较理想的方法。但普通荧光光谱法存在萃取剂石油醚对维生素E有干扰，使测定结果准确性低的缺点。本实验探讨了采用同步荧光光谱法测定蔬菜中维生素E，该方法消除了石油醚的干扰，提高了实验的准确性。

1实验部分

1,1试剂与仪器

维生素E(Sigma公司，进口分装)，用时未经进一步纯化，溶于无水乙醇。其他试剂均为国产分析纯，所用溶液均用二次去离子水新鲜配制。

日立F-4500型荧光分光光度计(日本日立公司)。

1,2样品的制备与光谱测定

维生素E采用周松的方法提取。吸取一定量的维生素E提取液于20mL棕色带塞试管中，加入5.0mL分析纯石油醚振荡1min，静置分层后(如有乳化现象，加少许无水乙醇)，用注射器移去下层，上层石油醚分别用蒸馏水洗涤2～3次固定激发波长λex=295nm，在λem=300～500nm扫描维生素E普通荧光光谱;固定Δλ=30nm，λex=200～400nm下，测定同步荧光光谱，记录其λex=295nm处的荧光值。

2结果与讨论

2,1维生素E的激发光谱和荧光光谱

用含维生素E2.0mg/L的标准乙醇溶液作校正光谱多次实验表明，维生素E的激发光谱和发射光谱均为λex295nm/λem327nm，结果见图1和图2，与项光华、李艳飞等人的报道相符。

2,2石油醚和维生素E的荧光光谱、同步荧光光谱

按照实验方法，扫描石油醚和维生素E(10.0mg/L)的荧光光谱和同步荧光光谱并进行比较，结果发现，溶剂和维生素E在λem=327nm处荧光发射光谱相互重叠(图3)。从两者的同步荧光光谱可以看出，同步荧光法使2种物质分别在λ=250nm和λ=290nm处有最大发射(Δλ=30nm)，从而消除了石油醚对维生素E测定的影响(图4)。

2,3不同Δλ对维生素E同步荧光光谱的影响

采用同步荧光法测定蔬菜中的维生素E时，光谱形状不仅与物质本性有关，且与Δλ有关，Δλ越小，形成的同步光谱峰数越小、峰形越窄，但Δλ不能太小，只有当Δλ与发射峰、激发峰之间的波长相匹配时，才能产生比较强的荧光信号。2峰的分离情况通常用分离度R表示，当R<1时，2峰有部分重叠;R≥1时，表示2峰能明显分离，满足分析要求;R=1.5时，表示2峰能完全分离。

本实验分别测定了Δλ为10、20、30、40、50nm时维生素E和溶剂的同步荧光光谱，从图5和表1可以看出，Δλ为10、20、30nm时，随着Δλ的增加，同步荧光的荧光强度逐渐增强且三者R>1，综合图5和表1，Δλ=30nm时，维生素E的同步荧光光谱的荧光强度最大，且能够与溶剂的荧光光谱分离开，因此在实际测定中选择了Δλ为30nm。

         
2,4线性范围

将维生素E标准液配制成不同质量浓度的系列溶液，按上述测定方法进行测定，结果表明，其质量浓度在0.01～10mg/L内与其荧光强度成线性关系(图6)，回归方程为I=16.173ρ+1.1235，I为荧光强度，ρ为质量浓度，相关系数r=0.9995，检出限为0.0025mg/L。

2,5回收实验

取同等质量的油菜样品，分别加入一定量的维生素E的标准溶液，按上述测定方法分别进行处理、测定，计算样品中维生素E的回收率(表2)。从表2可以看出，回收率为101.18%～101.58%，平均回收率为101.37%。

2,6实际样品的测定

用上述的实验方法测定实际样品中维生素E的含量，测定结果见表3，从表3可以看出，相对标准偏差为2.4%，1.17%，说明实验的重复性较好，实验结果比较满意。

3小结

通过荧光光谱学对蔬菜中维生素E含量研究表明，以石油醚作萃取剂时，普通荧光光谱法不能够消除萃取剂对维生素E的干扰，采用同步荧光光谱法，当Δλ=30nm时维生素E的荧光强度最强，且能消除萃取剂石油醚的干扰作用。而且在0.1～10mg/L内荧光强度和维生素E浓度呈线性关系，回归方程为I=16.17ρ+1.1235，相关系数r=0.9995，样品的平均回收率为101.37%，实际样品测定结果的相对偏差(RSD)<5，0%，该法操作简便，快速，准确性高，重复性好，对大批量测定蔬菜中维生素E不失为一种理想的方法。

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