高压制备纽莫康定B0的中试研究（一）

纽莫康定B₀(Pneumocandin B₀)是棘白菌素类化合物，其半合成衍生物卡泊芬净(Caspofungin)已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的患者的侵袭性曲霉病。作为合成真菌药物卡泊芬净的中间体，纽莫康定B₀由真菌Zalerion arboricola发酵产生，发酵过程中会产生与纽莫康定B₀结构相近的副产物及大量的色素。按照结构中脯氨酸上取代基的不同主要分为A₀，B₀和C₀，其中B₀，C₀分别为同分异构体。由于C₀为B₀生产过程中的关键杂质，在生产纯化过程中去除C₀有一定的难度。因此，开发出一种有效的方法得到高纯度的纽莫康定B₀对于后续合成卡泊芬净尤为重要。

色谱分离法在化合物的分离中应用较为广泛，且色谱纯度、回收率和分离效率等方面远远优于传统的制备方法，其中色谱纯度通过面积归一化法得到。相比于中低压色谱制备，高压色谱制备效率高、柱效高。笔者以实验室制得的纽莫康定B₀粗品为原料，通过高压制备对纽莫康定B₀进行了放大中试研究，开发出了一种生产周期短、成本低和色谱纯度高的制备工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

U3000高效液相色谱仪，赛默飞Thermo公司；Cs-prep150工业制备色谱系统，汉邦科技；R-1001N型旋转蒸发仪，郑州长城科工贸有限公司；SHB-B95型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；DHJK-2020低温冷却循环泵，郑州科泰实验设备有限公司；SCIENTZ-12ND冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 试 药

工业级二氯甲烷，山东金岭化工股份有限公司；工业甲醇，兖矿国宏化工有限责任公司；改性硅胶，苏州纳微科技股份有限公司；纽莫康定B₀粗品，鲁南新时代生物技术有限公司提供，质量分数81.20%;纽莫康定B₀对照品，大同市矿区风华生物科技有限公司，质量分数95.56%，批号16001;纽莫康定C₀对照品，大同市矿区风华生物科技有限公司赠与，质量分数95.11%，批号16002;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 实 验

2.1 HPLC(高效液相色谱)法测定B₀

纽莫康定B₀检测方法：Thermo Hypersil GOLD C18，4.6 mm×250 mm， 5 μm; 以V(乙腈)∶V(水)=45∶55为流动相，等度洗脱；检测波长210 nm， 柱温40 ℃，进样量10 μL，流量1 mL/min， 运行时间45 min。以纽莫康定B₀对照品进行外标法定量。纽莫康定B₀对照品溶液的配制：取纽莫康定B₀对照品约20 mg， 精密称定，置于50 mL容量瓶中，加乙醇超声溶解后，稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为400 mg/L的纽莫康定B₀对照品溶液。供试品溶液配制：对制备液用氮气吹干，加乙醇振摇使溶解并稀释至质量浓度约1 000 mg/L，摇匀，用0.22 μm有机滤头过滤。纽莫康定B₀的结构式为

2.2 HPLC(高效液相色谱)法测定C₀

检测方法为公司自行开发，线性梯度洗脱程序如表1所示。Welch Ultimate HILIC Amide柱，4.6 mm×250 mm， 3.5 μm; 波长220 nm， 流量1.0 mL/min， 进样量10 μL，柱温40 ℃，流动相A为水，流动相B为乙腈。

以纽莫康定C₀对照品进行外标法定量，纽莫康定C₀对照品溶液的配制与纽莫康定B₀对照品溶液的配制相同。纽莫康定C₀的结构式为

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