不同树脂环纹数鸡血藤药材质量的分析和评价（四）

2.5.3 供试品溶液的制备

取鸡血藤粉末（过40目筛）1.0 g，精密称定，加甲醇60 m L，静置30 min后超声50 min；滤过，蒸干，残渣用20 m L蒸馏水溶解，转置分液漏斗中，分别加乙酸乙酯20 m L，萃取3次；合并乙酸乙酯液，减压回收至干。再加少许50%甲醇溶解，定容至10 m L量瓶，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.5.4 精密度试验

精密吸取10μL同一份鸡血藤药材供试品溶液，连续进样5次，各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD分别小于5%和0.6%，表明仪器精密度良好。

2.5.5 重复性试验

精密称取鸡血藤药材粉末5份，制备供试品溶液。分别进样10μL，测得供试品溶液各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD分别小于5%和0.6%，表明重复性良好。

2.5.6 稳定性试验

精密吸取同一份鸡血藤药材，制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、24 h时进样10μL，测得供试品溶液各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD分别小于5%和1%，表明样品溶液在24 h的稳定。

2.5.7 共有模式的建立

将供试品溶液按选定的色谱条件测定，得到17个样品的图谱，根据国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”（2010年版），以编号S1为参照图谱，生成对照图谱（见图5）及样品叠加图谱（见图6）。

2.5.8 共有峰的标定

按选定的色谱条件分别将对照品及供试品进样分析，记录色谱图。采用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”（2010年版）处理图谱，得供试品溶液共有模式图，并计算同一植株不同环纹数样品间相似度（见表6～表8），其中共有模式上保留时间及色谱峰相对稳定的峰中，原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、大豆苷元、染料木素、异甘草素、芒柄花素可明确被指认出。

2.5.9不同环纹数藤茎部位的鸡血藤相似度评价

由图6及表6～表8可以看出，不同环纹数藤茎部位的鸡血藤相似度均较高，其中具1个树脂环的样品与其他样品间相似度相对较低，除梅州具1个树脂环的样品相似度为0.853，其它同一植株不同树脂环纹数样品均在0.9以上，表明同一植株不同树脂环纹数样品所含化学组分相近。

3 讨论

由图2可以看出，梅州居群鸡血藤样品染料木素、芒柄花素在1环到2环样品中含量大幅度下降，之后含量变化平缓（7环之后有轻微的上升趋势），出现这一现象的原因可能是染料木素、芒柄花素为植物雌激素类成分，它们可能在植物幼苗期含量较高，在植物发育至一定程度时不再大量累积。而从化居群样品并没有这个趋势，可能的原因为采样时，梅州居群鸡血藤1、2环药材均粗于从化流溪河居群样品，其树脂环较宽，新鲜树脂的颜色较后者更浓，而从化居群的鸡血藤1、2环样品栓皮部还带有明显的绿色，树脂环较细；梅州居群与从化、惠州2个居群鸡血藤各化学成分变化趋势有着较大的差异，可能原因是环数原因，惠州居群样品偏心性环纹数相对较多，且新鲜时树脂颜色鲜红。因此，笔者认为，不同居群来源鸡血藤样品中次生代谢物质动态变化特征的不一致性，可能与其植株采集时的生长状况有关，尤其是与藤茎断面的树脂环纹的形成有关，如木质部与韧皮部之间的间距大小、树脂的多少与色泽的深浅等，而不同居群样品的上述性状特征均具有一定的差异性。由图6可以看出，同一居群不同环纹数的鸡血藤样品在成分的种类上并没有太大的变化，主要是含量的变化。现有大量研究表明，影响植株生长状况及体内次生代谢物质积累变化的因素有可能是多种因子综合作用或某一个或者几个因子发挥着主导作用，如外环境中的气候条件（水分、光照强度、温湿度等）、地形地势及土壤环境等和内在因素（遗传因子等），因此，很有必要进一步对鸡血藤药材品质形成的影响因素进行深入系统的研究。

针对选择具有几个树脂环纹数的鸡血藤藤茎入药的问题，本研究选取同一植株同一条藤茎具有不同环纹数部位的样品进行了药材质量的综合分析比较，以探讨树脂环纹数对鸡血藤质量的影响。含量测定结果显示，鸡血藤中醇溶性浸出物、指标性成分儿茶素、表儿茶素、原儿茶酸、芒柄花素及染料木素的含量在同一植株不同树脂环纹数样品中的变化趋势各不相同，且不同植株中的变化趋势也不相同；各测定指标的含量在不同树脂环纹样品中的变化较为波动，3～5环的样品中醇溶性浸出物均高于或明显高于具1个树脂环纹的样品，儿茶素及表儿茶素的含量在不同环纹数样品中的波动较大，但以1个树脂环纹的为最低。HPLC指纹图谱研究结果显示，1个树脂环纹的样品与2环以上的样品的相似度较低，表明鸡血藤药材以3环及以上为宜。

Spearman相关性分析表明鸡血藤断面的树脂纹环数与各指标成分均无明显的相关性，故鸡血藤环纹数不能单纯作为评价其药材质量好坏的标准。据本实验结果，认为现行《中国药典》鸡血藤项下性状鉴别中未提及树脂环纹数是合理的，建议结合醇溶性浸出物及指标性成分（儿茶素、表儿茶素）的含量来综合评判。而梅余琪等采用主成分分析方法对韧皮部不同环纹数的鸡血藤药材进行评价，发现韧皮部环纹数与多指标成分含量具有一定正相关性，与本实验结果有所不同，可能与所选择的化学成分的种类及分析方法有关。而鸡血藤断面的树脂纹环数与其化学成分是否相关，尚有待进一步分析研究。

由于鸡血藤为多年生植物，其终年不落叶，藤茎的粗细与其断面含树脂的偏心性环纹数不具一定的相关性，从藤茎的性状特征无法判断其生长的年限，故同一居群的不同植株鸡血藤的生长年限难以准确判断。且生长年限不同，次生代谢产物的累积也不同，故本实验选取鸡血藤同一植株作为实验样本。但本实验由于鸡血藤采样的居群的数量较少，后续应采集更多的居群样品进一步深入研究。

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