基于UPLC／Q-TOF-MS分析白术炮制前后差异性成分（一）

发布时间：2021-05-03 12:10 编辑者：周世红

白术为菊科植物白术的干燥根茎。具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎的功效，常用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安。白术的药理作用大致可以分为6类，即对消化系统的作用、对免疫系统的作用、对泌尿系统的作用、对子宫平滑肌作用、抗衰老作用等一系列其他作用。其中白术中的白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ、苍术酮及芹烷二烯酮都表达了较强的抗炎活性。始载术时，未分白术与苍术，统称为术。炮制在我国古代医药领域上有着举足轻重的地位。《本草从新》记载“白术，有火者宜生用，凡炒白术，止宜炒黄，若炒焦则气味全失”。临床上“生”、“炮”白术应用差异较大，生用长于健脾燥湿，经麸炒后药性缓和，长于健脾益气。因此，有必要在临床实践中区分生白术与白术炮制品。白术中的化学成分研究已经有报道，但对于白术生、炮制品的化学成分差异分析却较少，尤其是对于比较两种炮制品的差异。本文基于UPLC—TripleTOFMS／MS建立白术麸炒白术、清炒白术的化学成分图谱，利用PCA主成分分析法寻找生品与各炮制品间的成分差异，为白术炮制原理研究提供依据。

一、材料

WatersAcquityUPLC液相色谱仪(Waters公司，美国)lTripleQ-TOF5600质谱仪(ABSciex公司，美国)；KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，中国)；IKA涡旋振荡器(IKA公司，德国)；0.22μn微孔滤膜(Millipore公司)；AGl35型分析天平(上海梅特勒托利多仪器有限公司，中国)；高速低温离心机(Thermo集团公司，美国)；色谱级甲醇(Fisher公司，美国)；色谱级乙腈(Fisher公司，美国)；色谱级甲酸(天津科密欧化学试剂有限公司，中国)，蒸馏水(广州屈臣氏食品饮料有限公司，中国)；白术(购自黑龙江中医药大学实训中心)。

二、方法

1、样品炮制

（1）麸炒白术制备

麸炒白术方法采用二维红外成像仪检测炒药机的锅中温度，待温度达到280～330℃时，加入麦麸，待冒烟时，迅速将白术饮片加入锅中，炒制28min左右，取样待至室温，制成粉末。

（2）清炒白术制备

清炒白术方法采用二维红外成像仪检测炒药机的锅中温度，待温度达到280-330℃时，迅速将白术饮片加入锅中，炒制16min(炒黄)，取出一定量炒黄样品，继续炒制，至22min左右(炒焦)，取样待至室温，制成粉末。

2、色谱条件

色谱柱：AcquityUPLCBEHC18(100mm×2.1mm，1.7gm，Waters)；流动相A：0.1％甲酸水溶液，流动相B：0.1％甲酸-乙腈；梯度洗脱条件：0～3min(95％～95％A)；3～6min(95％～65％A)；6～10min(65％～50％A)；10～15min(50％～35％A)；15～25min(35％～5％A)；25～28min(5％～5％A)；柱温：40℃；流速：0.4mL／min；进样量：2μL。

3、质谱条件

正离子模式质谱条件：扫描检测，m／z100-1500，离子喷雾电压(ionsprayvoltage，ISVF)分别为5500V；去簇电压(declusteringpotential，DP)分别为80eV；碰撞电压(collisionenergy，CE)分别为10eV；雾化气体(ionsourcegasl)50；辅助加热器(ionsourcegas2)50；气帘气(CUR)30；去溶剂温度(TEM)为500.00℃。

4、供试品制备

将白术生品粉碎，过60目筛，得白术生品粉末。取2g，加入甲醇50mL，记录瓶的重量并将瓶密封并在室温下超声30min。补足至原始溶剂重量，取适量样品溶液过0.22μm微孔滤膜，离心15min，精密吸取滤液200μL，密封备用(各炮制品供试品制备方法同生品制备方法)。

三、结果

1、白术炮制前后各样品的总离子流图比较

正离子模式下进行分析，得白术生品与各炮制品的供试品基峰图(BPC)色谱图，详见图1。由图中可以看出，炮制后的白术与生品白术的总离子流图基本相似，但也存在不同的色谱峰，并且离子强度也存在着明显的差异，说明在炮制后有些成分在含量中存在变化。(A：生品组分；B：麸炒白术；C：清炒白术-炒黄；D：清炒白术-炒焦)。

2、差异性化学成分的筛选与鉴定

通过PCA模式识别各样品的得分图表明白术生品与各炮制品在化学成分上存在明显差异，并且麸炒白术、清炒白术-炒黄、清炒白术-炒焦组分也各自分组，说明各炮制品间也存在这差异成分。为找出存在差异的成分，进一步分析数据的差异性，对其进行散点分析，即图2-(b)loading图。图中的每一个点都代表一个化合物，距离中心远点越远的地方对差异的贡献值是越大的。结果说明白术生品与其各炮制品的化学成分有着较为明显的差异。差异性化学成分详见表1。