基于UPLC／Q-TOF-MS分析白术炮制前后差异性成分（二）

3、主要差异性成分鉴定

化合物1：白术内酯I的质谱鉴定过程为例，运用Peakview软件在正离子模式下提取tR=17.76和[M+H]+=231.1018离子，通过Masterview功能进行峰提取，在相应的保留时间确认其一级质谱中的母离子，再利用多级碰撞能获得该化合物的二级质谱图，得到该化合物裂解六个碎片离子，其m/z分别为185.1178，143.0815，129.0718，105.0886，91.0777。推测其在裂解过程中失去-CH₂O产生m/z为185.1178的离子碎片峰；失去-C₂H₄产生m/z为157.1031的离子碎片峰，m/z为185.1178还会失去-C₃H₆产生m/z为143.0815的离子碎片峰；m/z为157.1031失去-C₂H₄产生m/z为129.0718的离子碎片峰，同时m/z为157.1031还可能失去-C₅H₆产生m/z为91.0777的离子碎片峰；m/z为129.0718失去-2C产生m/z为105.0886的离子碎片峰；并发现m/z为105.0886的还可能失去-C₇H₆产生m/z为91.0777的离子碎片峰。母离子[M+H]+=231.1018，保留时间17.76，误差-0.4ppm，推测其分子式为C₁₅H₁₈O₂，通过在线数据对上述信息进行比对分析，最终化合物为白术内酯I，其正离子模式下母离子提取及裂解过程见图3。

化合物2：运用Peakview软件在正离子模式下提取tR=13.45和[M+H]+=233.1150离子，得到该化合物裂解七个碎片离子215.1136，187.1323，159.0776，145.1041，131.0942，105.0884，91.0778。母离子[M+H]+=233.1150，保留时间13.45，误差0.5ppm，推测其分子式为C₁₅H₂₀O₂，通过在线数据对上述信息进行比对分析，最终化合物为白术内酯Ⅱ，其正离子模式下母离子提取及裂解过程见图4。

化合物3：运用Peakview软件在正离子模式下提取tR=13.50和[M+H]⁺=249.1482离子，得到该化合物裂解六个碎片离子231.1015，213.0999，163.0708，119.0992，105.0888，91.0781。母离子[M+H]+=249.1482，保留时间13.50，误差-0.7ppm，推测其分子式为C₁₅H₂₀O₃，通过在线数据对上述信息进行比对分析，最终化合物为白术内酯Ⅱ，其正离子模式下母离子提取及裂解过程见图5。

4、差异性成分含量比较

通过MarIreriew软件协助下，共找到6种含量变化较大的化学成分。分别是：7-Hydroxycoumarin、AtractylenolideVI、AtractylenolideⅡ、AtractylenolideⅢ、AtractylenofideI、8-β-methoxyatractylenolideI。量变化趋势如下：AtractylenolideVI、AtractylenolideⅡ在炮制后含量趋于下降趋势，7-Hydroxycoumarin、AtractylenolideⅡ、AtractylenolideI、8-β-methoxyatractylenolideI在炮制后含量呈现上升趋势。差异性成分含量变化趋势见图6。

5、讨论

预实验中，比较了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-0.1％甲酸水，乙腈-0.1％甲酸水不同流动相系统对色谱分离效果的影响。结果表明乙腈-0.1％甲酸水系统为最优条件，此条件下所得的色谱峰具有更好的峰形，更高的响应以及满意的分离度。本实验应用电喷雾离子源(ESI)，考察了正负离子模式下采集的信号，结果发现在正离子模式下白术中化学成分的响应灵敏度远高于在负离子模式下，因此，本实验仅对正离子全扫描模式下所采集的特征离子峰进行定性分析。

本文基于UPLC/Q-TOF-MS技术对白术生品与各炮制品的化学成分的差异性进行分析，并利用PCA方法进行数据处理，在相关Peakview、Masterview、Markerview等软件的协助下，共找到6种差异性成分。分别是：7-Hydroxycoumarin、AtractylenolideVI、AtractylenolideⅡ、AtractylenolideⅢ、AtractylenofideI、8-β-methoxyatractylenolideI。本研究一方面丰富了对白术炮制品的化学成分变化的认识，同时也为液质联用技术在中药炮制化学变化原理研究中提供了一定的研究基础。

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