超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉和鸡蛋中25种兽药残留（一）

随着畜禽养殖业呈集约化、规模化、商业化、高密度发展，畜禽病害呈现高频化、复杂化趋势，为降低发病与死亡带来的经济损失，兽药被广泛用于预防和治疗畜禽疾病，或以亚治疗剂量添加于饲料中以促进动物生长、改善动物产品品质和提高饲料利用率。但部分畜禽养殖场人员缺乏对药物危害的认知及科学用药的指导，或受经济利益驱使，不合理用药，甚至非法滥用各类兽药，且不严格遵守休药期，导致畜禽产品中兽药残留超标现象时有发生。无论兽药残留水平高低，通过长期的食物链蓄集到一定量后会对人体产生毒副作用，如过敏反应，泌尿系统、生殖系统、心肌损害等，某些药物还具有潜在的致畸性、致癌性，或致休克甚至死亡。此外，病原菌在长期接触这些低浓度药物后，容易增加病毒的耐药性及变异的可能性，从而减弱人类疾病的治疗效果，使公共卫生面临严峻的挑战和威胁。兽药残留还会使畜禽产品出口受阻，影响畜禽业的健康持续发展和国家的经济发展。因此，开展兽药残留的检测研究，规范用药，以指导生产，保障食品安全，提高人民健康水平，增强畜禽产品的市场竞争力。

目前，兽药残留的检测方法有酶联免疫法、生物法、电化学法、气相色谱法、高效液相色谱法及高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)等。其中，生物法和酶联免疫法的检测结果容易出现假阳性；高效液相色谱法和气相色谱法的灵敏度低、选择性差，且多集中于单一种类兽药的分析，完成一个样品中多类药物测定需采用不同的方法，前处理过程耗时、繁琐，检测低效高价；超高效液相色谱-串联质谱法具有高通量、高选择性、高分离度、高灵敏度、高检测效率等优势，是兽药多残留检测的首选方法。鸡蛋、鸡肉样品基质复杂且兽药大多为微量甚至痕量残留，而国家要求的残留限量较低，给检测工作带来巨大挑战。虽然兽药多残留检测已有较多文献报道，但未见同时测定鸡蛋和鸡肉中磺胺类、喹诺酮类、氯霉素类、金刚烷胺类兽药残留的报道。

本研究拟建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡蛋和鸡肉中磺胺类、喹诺酮类、氯霉素类和金刚烷胺类兽药残留，希望为禽类产品中兽药残留的检测提供有效手段。

1实验部分

1.1仪器与装置

1290超高效液相色谱仪、ZORBAXC18色谱柱(50mm×2.1mm×1.8μm)：美国Agilent公司产品；QTRAP5500三重四极杆/线性离子阱质谱仪：美国ABSciex公司产品；涡旋振荡器：美国ThermoScientific公司产品；JD200-2电子天平：沈阳龙腾电子有限公司产品；TGL-15B型高速台式离心机：上海安亭科学仪器厂产品；旋转蒸发仪：德国海道尔夫公司产品。

1.2样品与试剂

磺胺二甲异噁唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹噁林、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噻二唑、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、氟罗沙星、培氟沙星、洛美沙星、氧氟沙星、金刚烷胺、金刚乙胺、金刚烷胺-D15(10mg/L)，恩诺沙星-D5、诺氟沙星-D5、环丙沙星-D8、磺胺邻二甲氧嘧啶-D3、磺胺间二甲氧嘧啶-D6、氯霉素-D5溶液标准物质(5mg/L)，氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素溶液标准物质(100mg/L)：均购于农业农村部农产品质量标准研究中心；甲醇、乙腈：色谱纯，德国Merck公司产品；甲酸：色谱纯，美国Sigma公司产品；无水硫酸钠、乙酸铵、氯化钠、正己烷、环己烷、盐酸(优级纯)、氨水(分析纯，含量25%～28%)、磷酸氢二钾(分析纯)：上海国药集团产品；PSA、C18填料(50μm)：中国迪马科技公司产品；二甲亚砜：分析纯，天津风船化学试剂科技有限公司产品；实验用水：自制超纯水。

1.3溶液配制

用甲醇稀释各兽药溶液标准物质：金刚烷胺、金刚乙胺、氯霉素配制成0.1mg/L，喹诺酮类、磺胺类、甲砜霉素、氟甲砜霉素配制成1.0mg/L，7种内标均配制为0.5mg/L贮备液，于4℃下避光保存。系列标准溶液用甲醇配制，现用现配。

0.2mol/L盐酸溶液的配制：取1.5mL盐酸(36%～38%)，用超纯水定容至100mL。

1.4样品前处理

1.4.1样品提取

称取5.00g(精确至0.01g)均质试样于50mL塑料离心管中，加入30μL0.5mg/L内标溶液、5.0mL盐酸溶液，涡旋至样品分散后，加15.0mL乙腈和7～9g氯化钠至溶液呈过饱和状态，涡旋提取5～7min，以5000r/min离心5min，取出乙腈层至50mL离心管中，向残渣中加15.0mL乙腈重复提取1次，合并2次提取液，待净化。

1.4.2样品净化

向上述待净化提取液中加入8～10mL正己烷-环己烷混合溶液(1∶1，V/V)，涡旋1min，以5000r/min离心5min，取乙腈层浓缩至干，加入2.0mL0.2%甲酸-乙酸乙酯溶液溶解残留物，过0.22μm滤膜后再将滤液蒸干，加入1.0mL0.2%甲酸-甲醇溶液复溶，待净化。

将30mgC18和60mgPSA吸附材料混匀，加入下端垫有滤纸的2.0mL塑料医用注射器中，再加入2.0mL0.2%甲酸-甲醇溶液淋洗，除去淋洗液，将上述1.0mL待净化溶液转移至净化柱，使其在重力作用下流出，接收净化液，过0.22μm滤膜，待UHPLC-MS/MS测定。

1.5实验条件

1.5.1色谱条件

流动相：A为0.1%甲酸-水溶液(含0.1mmol/L乙酸铵)，B为0.2%甲酸-甲醇溶液；流速0.2mL/min；柱温35℃；进样量2.0μL；梯度洗脱程序：0.00～3.00min(10%～40%B)，3.00～6.00min(40%～95%B)，6.00～8.00min(95%B)，8.00～8.20min(95%～10%B)，8.20～10.00min(10%B)。

1.5.2质谱条件

ESI离子源；离子源温度550℃；喷雾气(GS1)压力0.379MPa；辅助加热气(GS2)压力0.379MPa；气帘气压力0.241MPa；正、负离子模式同时扫描，其中氯霉素类药物为负离子模式扫描，喷雾电压-4500V，多反应监测模式(MRM)；磺胺类、喹诺酮类、金刚烷胺类为正离子模式扫描，喷雾电压5500V，多反应监测模式，其他质谱参数列于表1。

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