基于HPLC指纹图谱结合化学模式识别的黄蛭益肾胶囊质量控制（二）

2.5 指纹图谱建立及相似度评价

将16批黄蛭益肾胶囊按照“2.3.1”项方法制备供试品溶液，根据“2.1”项色谱条件进样，得到16批样品色谱图。将色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）”软件，以S1为参照图谱，时间宽度0.1 min，进行mark峰匹配，以中位数法生成黄蛭益肾胶囊的对照指纹图谱，共匹配了24个共有峰。其中16号峰毛蕊异黄酮保留时间适中，峰形较好，故选择为参照峰（S）。16批样品的相似度在0.925～0.995。结果见表1和图1。

2.6 指纹图谱中共有峰的化合物结构鉴定及药味归属

取黄蛭益肾胶囊供试品溶液、混合对照品溶液、对照药材溶液、各味药的阴性样品溶液，按“2.1”项下色谱条件、“2.2”项下质谱条件，分别在正、负离子模式下，进行扫描检测，得到一级准分子离子峰和二级裂解碎片，通过各对照品的二级质谱裂解规律和相关文献报道，对黄蛭益肾胶囊的24个共有峰进行化合物结构鉴定，并进一步用对照品比对确定了其中8个峰。通过与每味药的阳性药材以及缺每味药的阴性样品对比，24个峰被分别归属到7味药材中：黄芪、杜仲、车前子、墨旱莲、益母草、三七及玄参。其中7号峰毛蕊异黄酮葡萄糖苷、12号峰美迪紫檀苷、13号峰黄芪异黄烷苷、16号峰毛蕊异黄酮、17号峰6''-O-乙酰基芒柄花苷、20号峰芒柄花黄素、21号峰7,2'-二羟基-3',4'-二甲氧基异黄烷共7个黄酮类成分归属于君药黄芪；1号峰京尼平苷酸、2号峰原儿茶酸、4号峰绿原酸、6号峰松脂醇二葡萄糖苷、8号峰松脂醇单葡萄糖苷、15号峰杜仲醇6种成分来源于杜仲；11号峰人参皂苷Rg1、19号峰人参皂苷Rh1、22号峰三七皂苷T5、23号峰人参皂苷Rh4、24号峰人参皂苷Rh4异构体5种皂苷类成分来源于三七；4号峰绿原酸和5号峰丁香酸来源于益母草；1号峰京尼平苷酸和3号峰车前素来源于车前子；2号峰原儿茶酸、4号峰绿原酸、18号峰木犀草素来源于墨旱莲；9号峰安格洛苷C和14号峰肉桂酸推断来源于玄参。黄蛭益肾胶囊中的24个化合物鉴定结果见图2和表2。

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