高效液相色谱-三重四极杆复合离子阱质谱法快速检测保健食品中30种缓解疲劳改善睡眠类违禁添加药物（三）

2.3EPI数据库的建立

将获得的30种化合物增强型二级碎片离子（EPI）质谱图，与数据处理软件Analyst相连接，导入每种化合物的EPI图谱并编辑相应的化合物名称、CAS登记号、碎片离子信息（精确质量、化学式）等信息，形成30种目标化合物的EPT数据库，信息详见表2。此数据库中每种目标化合物都有低、中、高三种能量叠加形成的EPI质谱图，该质谱图中二级碎片离子的响应为三种能量下响应的平均值，因此准确性更高。EPI质谱图碎片信息丰富，实现了无需标准品对照，也可对样品中是否含有30种违禁添加药品进行搜库筛查，全面确证。

2.4方法检出限、定量限、线性关系及基质效应考察结果

分别用空白片剂、颗粒剂和胶囊将片剂、颗粒剂和胶囊（内容物）样品细致研磨，得到均质样品后称量，称取0.1000g左右样品于100mL容量瓶中，加入甲醇适量，超声提取30min，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，静置，取上清液经0.22μm有机滤膜过滤，取滤液待测。若阳性样品浓度超出线性范围则用甲醇按一定比例稀释后再测。

制作空白基质溶液，将混合标准溶液单个标准品储备液的配制：将30种违禁添加药物分别称取约10mg，置于10mL容量瓶中，11种那非类标准品中加入一定量的乙腈超声溶解后定容，其余标准品加入一定量甲醇超声溶解后定容，均配制成浓度约为1mg/mL的标准品储备液，并保存于-4℃冰箱中。

色谱柱：PhenomenexKjneLex-C18色谱柱，规格50mm×2.1mm，2.6μm；柱温：40℃；流动相：A为乙腈，B为10mmol/L乙酸铵水溶液；梯度洗脱：0～7min，10％A～90％A，7～8min，90％A，8～8.1min，90％A～10％A，8.1～10min，10％A；流速：250μL/min；进样量：1μL。离子源：TurboV电喷雾离子源（ESI）；扫描模式：正、负离子同时扫描，定时多反应监测→信息依赖性获取→增强型子离子扫描（ScheduledMRM→TDA→EP）；扫描范围：50～650Da；气帘气（CUR）：30psi；碰撞气（CAD）：High；喷雾电压（IS）：5500V/-4500V；离子源温度：550℃；雾化气（GASl）：55psi；辅助气（GAS2）：55psi。

获得各化合物的信噪比（S/N），以3倍S/N和10倍S/N对应的浓度来确定30种化合物的检m限（LOD）和定量限（LOQ）。分别用甲醇和三种空白基质溶液来稀释混合标准溶液。单个标准品储备液的配制：将30种违禁添加药物分别称取约10mg，置于10mL容量瓶中，11种那非类标准品中加入一定量的乙腈超声溶解后定容，其余标准品加入一定量甲醇超声溶解后定容，均配制成浓度约为1mg/mL的标准品储备液，并保存于-4℃冰箱中。

分别精确吸取30种标准品储备液适量于一个100mL容量瓶中，用甲醇稀释混匀后定容。使浓度为1～10μg/mL的混合标准品溶液，待使用时进一步稀释。配制成5个梯度浓度的混合标准曲线工作溶液，共四组。以各日标化合物的峰面积（Y）和对应的浓度（X）进行线性拟合，得到线性方程、相关系数及标准曲线斜率，结果见表3。

采用相对响应值法比较，计算出30种化合物在三种基质中的基质效应，结果见表3。实验表明，30种目标化合物在其线性范同内，线性关系均良好，决定系数（R2）均大于0.996。基质效应为0.87～1.04，结果详见表4，因此三种空白基质标准溶液和甲醇标准溶液的同归方程斜率偏差为-4％～13％，均在标准曲线斜率的±20％范围内，EPI无差异，可忽略基质效应的影响。

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