UPLC-Q-TOF-MS/MS快速分析六味地黄苷糖片化学成分（一）

目的 采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对六味地黄苷糖片中的化学成分进行分析和鉴定。方法 色谱柱为phenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.3%甲酸水溶液作为流动相，梯度洗脱，体积流量1mL/min，柱温35℃，进样量10μL；采用电喷雾离子源（ESI），负离子模式下采集数据，根据精确质荷比、二级碎片离子信息，结合对照品和文献数据鉴定六味地黄苷糖片中的化学成分。结果共鉴定和推测出71个化合物，其中25个来自酒萸肉，19个来自熟地黄，31个来自牡丹皮，2个来自泽泻，3个来自茯苓，2个来自山药。其中22个化合物经对照品验证。结论该结果基本明确了六味地黄苷糖片的化学物质基础，为六味地黄苷糖片的质量控制及药效物质基础研究提供了参考。六味地黄汤是中医滋补肾阴的经典名方，由熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻组成，由宋朝名医钱乙首创，主要用于腰膝酸软、头晕目眩、耳聋耳鸣、盗汗自汗等肾阴不足之症。近代实践证明，六味地黄方广泛应用于治疗肾脏疾病、更年期综合症、高血压、肝脏疾病等数十种疾病。

六味地黄苷糖片是基于对六味地黄汤的大量基础研究开发而成，用于治疗伴有肾阴虚的更年期综合症。该药从汤剂出发，经过两步醇沉、两步层析分离得到了苷类、多糖以及寡糖等三个有效部位，在此基础上得到了六味地黄苷糖片。

研究表明六味地黄苷糖片具有改善慢性多重不可预期应激所致焦虑抑郁样行为及阿尔茨海默病动物模型转基因小鼠认知缺陷的作用，其中苷类成分对免疫及内分泌调节起重要作用。为阐明六味地黄苷糖片的药效物质基础，本实验对六味地黄苷糖片中的化学成分（主要为苷类成分）进行了研究，运用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对六味地黄苷糖片中的成分进行定性分析，为六味地黄苷糖片的质量控制及药效物质基础研究提供依据。

1 材料

Agilent 1290超高效液相色谱仪（DAD检测器，美国安捷伦公司）；Agilent 6538 Q-TOF质谱仪（美国安捷伦公司）；Mettler Toledo XP6电子分析天平（瑞士梅特勒公司），1/100万；Mettler Toledo AL204电子分析天平（瑞士梅特勒公司），1/10万；KQ-500DB型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；Milli-Q Academic纯水仪（美国密理博公司）。色谱乙腈（德国默克）；色谱甲酸（美国天地）。

莫诺苷（111998-201703，97.4%，中国食品药品检定研究院），马钱苷（111640-201808，99%，中国食品药品检定研究院），芍药苷（110736-201943，95.1%，中国食品药品检定研究院），牡丹酚原苷（200302，98%，南京森贝伽生物），腺苷（201901，98%，南京森贝伽生物），獐芽菜苷（7001，98%，上海施丹德），毛蕊花糖苷（111530-201914，95.2%，中国食品药品检定研究院），异毛蕊花糖苷（7283，98%，上海施丹德）, 松果菊苷（201904，98%，南京森贝伽生物，氧化芍药苷（19120604，99.67%，成都普菲德生物技术有限公司），山茱萸新苷（19080905，98%，成都普菲德），地黄苷D（7433，98%，上海施丹德），没食子酰芍药苷（201901，98%，南京森贝伽生物），马钱苷酸（111865-201704，97.4%，中国食品药品检定研究院），连翘酯苷E（DSTDL008301, 98%, 德斯特生物），丹皮酚新苷（DST200910-076，98%，德斯特生物），獐芽菜苦苷（110785-201404，98.3%，中国食品药品检定研究院），8-表番木鳌酸（DST200422-157，98%，德思特生物），焦地黄苯乙醇苷B（LOT8184，98%，上海诗丹德），没食子酸（110831-201605，90.8%中国食品药品检定研究院）。六味地黄苷糖片（20181001），江苏康缘药业股份有限公司生产。

2 方法

2.1 检测条件

2.1.1 色谱条件

色谱柱为phenomenex Luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.3%甲酸水溶液（B），梯度洗脱（0-22 min，4%-8%A；31-60 min，8%-14%A；65-80 min，18%-25%A；85 min, 90%A），柱温35 ℃，流速1 mL·min-1，检测波长250 nm，进样量10 μL。

2.1.2 质谱条件

电喷雾离子源（ESI），负离子模式，毛细管电压4 000 V，质量扫描范围100-2 000；干燥气温度350 ℃；干燥气体积流量10 L·min-1；雾化气压力275.75 kPa;裂解电压100 V；锥孔电压65 V；碰撞能量根据不同化合物的需要选取15～40 eV。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制

分别取莫诺苷、马钱苷、芍药苷、牡丹酚原苷、丹皮酚新苷、山茱萸新苷、腺苷、獐芽菜苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、松果菊苷、氧化芍药苷、地黄苷D、没食子酰芍药苷、、8-表番木鳌酸、焦地黄苯乙醇苷B、獐牙菜苦苷、连翘酯苷E、马钱苷酸、没食子酸适量置于容量瓶中，用水溶解稀释至刻度，制备成含各成分50～100 μg/mL混合对照品溶液，经0.22 μm微孔滤膜过滤备用。

2.2.2 供试品溶液的配制

取六味地黄苷糖片10片，研细，取约0.2 g，精密称定，置10 mL容量瓶中，加纯水适量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）5分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，经0.22 μm微孔滤膜过滤即得。

3 结果与分析

按2.1项下条件检测六味地黄苷糖片供试品溶液，得到对照品及六味地黄苷糖片负离子模式下总离子色谱图（TIC），见图1、2。根据精确质荷比，二级碎片离子信息，结合对照品和文献数据共鉴定和推测出71个化合物，其中25个来自酒萸肉，19个来自熟地黄，31个来自牡丹皮，2个来自泽泻，3个来自茯苓，2个来自山药。

声明：本文所用图片、文字来源《中草药》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。

相关链接：化学成分，离子，液相色谱