研究产α-L-鼠李糖苷酶细菌Bacillusvelezensis的筛选及酶学性质（二）

2.结果与分析

2.1产α-L-鼠李糖苷酶海洋细菌的筛选与鉴定

2.1.1产α-L-鼠李糖苷酶菌株的筛选

将富集培养的泥样梯度稀释后，涂布于添加柚皮苷的筛选培养基，30℃倒置培养，每天观察长出的菌落形态及透明圈出现情况。挑取初筛出现透明圈的菌落，分离纯化后挑取单菌落点样至筛选平板。筛选平板分四块区域点样后放入30℃培养箱倒置培养，7d后获得1株有明显透明圈菌株，如图1。将该菌株命名为DTC03。

2.1.2菌株DTC03的形态学特征

观察平板中的菌落形态，其菌落呈白色，不透明，边缘不规则，表面粗糙的半球状菌落(图2a)。革兰氏染色后发现菌株DTC03为长杆状的革兰氏阳性菌(图2b)。芽孢染色表明该菌株DTC03可以产生芽孢(图2c)。根据菌落形态，菌体形态，初步判定菌株DTC03属于芽孢杆菌属。

2.1.3菌株DTC03的生理生化特征

菌株DTC03明胶液化试验、吲哚试验、葡萄糖、甘露醇试验均呈阳性，甲基红试验为阴性(表1)。

2.1.4菌株DTC03的16SrDNA扩增及分析

将PCR扩增产物送到南京思普金生物科技有限公司测序，测得菌株DTC03的16SrDNA的序列为1392bp。将序列与NCBI数据库进行对比，结果显示该菌株DTC03的16SrDNA序列与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)的16SrDNA序列相似度达99.93%。选择与其亲缘关系较近的菌株进行比对，并使用MEGA7构建进化树，结果如图3所示，该菌是芽孢菌属，且与Bacillusvelezensis同源相似性最高。结合形态和生理生化特征，将鉴定菌株DTC03为Bacillusvelezensis。目前国内外尚未有Bacillusvelezensis产α-L-鼠李糖苷酶的相关报道。

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