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Yan等通过链霉亲和素突变体(Strep-Tactin)琼脂糖凝胶和SEC纯化了亲水性多肽标签(FLAG-tag)标记中性氨基酸转运蛋白(B0AT1)和链霉亲和素结合肽标签(Strep-Tag)标记ACE2,研究在有无RBD的情况下,ACE2与B0AT1复合物的晶体结构差异,推动病毒感染的分子基础研究。Hillen等利用组氨酸标记(HisTrap)亲和色谱柱纯化冠状病毒复制和转录的主要RNA聚合酶(Nsp 12)及其辅助因子Nsp 7和Nsp 8,分析这些蛋白质与RNA依赖性聚合酶的结构,应用于病毒RNA复制研究。
Gao等用Ni-NTA亲和色谱柱纯化了Nsp 12、Nsp 7和Nsp 8,解析了该聚合酶与抗病毒药物瑞德西韦(remdesivir)的结合方式。Riva等利用Ni-NTA亲和色谱柱对SARS-CoV-2的木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)和主蛋白酶(Mpro)进行纯化,从约 12 000 个临床阶段的小分子药物中筛选出13种具有治疗效果的小分子抑制剂。Yuan研究组将Protein G亲和柱用于患者体内SARS-CoV特异性人类单克隆抗体(CR3022)的纯化,研究发现CR3022可有效结合SARS-CoV-2的RBD蛋白,是一种潜在的抗病毒药物。Ju等使用Protein A亲和柱对SARS-CoV-2感染者B细胞中RBD特异性单克隆抗体进行纯化,从206种纯化的单克隆抗体中发现抗SARS-CoV-2中和活性抗体,且该抗体基本不结合SARS-CoV和MERS-CoV。
表1统计了上述AC和SEC纯化的多种新型冠状病毒相关蛋白质,并列举了纯化使用的蛋白标签。
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在新型冠状病毒肺炎疫情暴发以来,武汉病毒研究所申请的瑞得西韦治疗2019新型冠状病毒的用途专利引起了广泛关注,尽管用途发明是医药化学领域专利的重要形式,但是人们对其的认识程度却并不深刻,本文将从用途发明的定义、分类及具体案例探讨医药化学领域用途发明的创造性评价标准及撰写策略。
了解更多> >亲和色谱和尺寸排阻色谱是Nature, Science和Cell期刊报道文献中使用最频繁的蛋白质纯化技术。其中,AC是通过生物分子与功能配基的特异性作用对目标蛋白质进行分离纯化,是实验室中生物大分子分离纯化最具特异性和高效性的技术,但配基昂贵且偶联技术复杂,限制了其应用;SEC是根据相对分子质量差异对待测物中各组分进行分离,优势在于分辨率高,操作简单,但对于样品纯度要求很高,因此常用于亲和色谱后蛋白质的进一步纯化。在当前新型冠状病毒研究中,AC与SEC常被用于纯化病毒表面S蛋白、ACE2、S蛋白
了解更多> >Gao等用Ni-NTA亲和色谱柱纯化了Nsp 12、Nsp 7和Nsp 8,解析了该聚合酶与抗病毒药物瑞德西韦(remdesivir)的结合方式。Riva等利用Ni-NTA亲和色谱柱对SARS-CoV-2的木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)和主蛋白酶(Mpro)进行纯化,从约 12 000 个临床阶段的小分子药物中筛选出13种具有治疗效果的小分子抑制剂。Yuan研究组将Protein G亲和柱用于患者体内SARS-CoV特异性人类单克隆抗体(CR3022)的纯化,研究发现CR3022可有效结合SA
了解更多> >新型冠状病毒研究已取得一定进展,分离技术在其中发挥着重要作用。其中,AC和SEC广泛用于病毒相关蛋白质纯化中;精密仪器制造业的发展,促使HPLC分离效率的提升,是完成高灵敏度、快速解决病毒代谢组学分析的关键手段;新材料和电子技术的进步,带动磁珠和微纳分离技术的灵敏度提升和应用范围拓展,尤其是对化学试剂消耗降低,实现了对环境的友好,是解决细胞分析、核酸分离和免疫学检测的首选技术;传统的离心技术在病毒颗粒和细胞分离中发挥着不可替代的作用;电泳技术主要用于PCR产物分析。
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