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分离技术在新型冠状病毒研究和防疫检测中的应用(二)

发布时间:2021-06-04 11:58 编辑者:特邀作者余秀梅

1.2 病毒感染机制研究

Yan等通过链霉亲和素突变体(Strep-Tactin)琼脂糖凝胶和SEC纯化了亲水性多肽标签(FLAG-tag)标记中性氨基酸转运蛋白(B0AT1)和链霉亲和素结合肽标签(Strep-Tag)标记ACE2,研究在有无RBD的情况下,ACE2与B0AT1复合物的晶体结构差异,推动病毒感染的分子基础研究。Hillen等利用组氨酸标记(HisTrap)亲和色谱柱纯化冠状病毒复制和转录的主要RNA聚合酶(Nsp 12)及其辅助因子Nsp 7和Nsp 8,分析这些蛋白质与RNA依赖性聚合酶的结构,应用于病毒RNA复制研究。

1.3 新型冠状病毒的药物筛选及疫苗设计

Gao等用Ni-NTA亲和色谱柱纯化了Nsp 12、Nsp 7和Nsp 8,解析了该聚合酶与抗病毒药物瑞德西韦(remdesivir)的结合方式。Riva等利用Ni-NTA亲和色谱柱对SARS-CoV-2的木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)和主蛋白酶(Mpro)进行纯化,从约 12 000 个临床阶段的小分子药物中筛选出13种具有治疗效果的小分子抑制剂。Yuan研究组将Protein G亲和柱用于患者体内SARS-CoV特异性人类单克隆抗体(CR3022)的纯化,研究发现CR3022可有效结合SARS-CoV-2的RBD蛋白,是一种潜在的抗病毒药物。Ju等使用Protein A亲和柱对SARS-CoV-2感染者B细胞中RBD特异性单克隆抗体进行纯化,从206种纯化的单克隆抗体中发现抗SARS-CoV-2中和活性抗体,且该抗体基本不结合SARS-CoV和MERS-CoV。

表1统计了上述AC和SEC纯化的多种新型冠状病毒相关蛋白质,并列举了纯化使用的蛋白标签。

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