食品中微量铅的测定

一、测定原理

样品经消化后，在pH8.5～9.0的碱性条件下，铅离子与双硫腙生成红色配合物，可溶于三氯甲烷中。此红色配合物的深浅与铅离子的浓度成正比，与标准系列比较定量。

二、仪器

分光光度计。

三、试剂

①氨水（1+1）。

②盐酸（1+1）。

③酚红指示液（g／L）：称取0.10g酚红，用少量乙醇多次溶解后移入100mL容量瓶中，并定容至刻度。

④三氯甲烷。

⑤盐酸羟胺溶液（200g/L）：称取20g盐酸羟胺，加水溶解至50mL，加2滴酚红指示液，加氨水（1+1），调pH至8.5～9.0（由黄变红，再多加2滴），用二硫腙-三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷层绿色不变为止。再用三氯甲烷洗两次，弃去三氯甲烷层，水层加盐酸（1+1）呈酸性，加水至100mL。

⑥柠檬酸铵溶液（200g/L）：称取50g柠檬酸铵，溶于100mL水中，加2滴酚红指示液，加氨水（1+1），调pH至8.5～9.0，用二硫腙-三氯甲烷溶液提取数次，每次10～20mL，至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去三氯甲烷层，再用三氯甲烷洗2次，每次5mL，弃去三氯甲烷层，加水稀释至250mL。

⑦氰化钾溶液（100g/L）：称取10．0g氰化钾，用水溶解后稀释至100mL。

⑧淀粉指示液：称取0.5g可溶性淀粉，加5mL水搅匀后，慢慢倒入100mL沸水中，随倒随搅拌，煮沸，冷却备用。临用时配制。

⑨硝酸（1+99）：量取1mL硝酸，加入99mL水中。

⑩二硫腙-三氯甲烷溶液（0.5g/L）：称取0.5g研细的二硫腙，溶于50mL三氯甲烷中，如不全溶，可用滤纸过滤于250mL分液漏斗中，用氨水（1+99）提取3次，每次100mL，将提取液用棉花过滤至500mL分液漏斗中，用盐酸（1+1）调至酸性，将沉淀出的二硫腙用三氯甲烷提取2～3次，每次20mL，合并三氯甲烷层，用等量水洗涤2次，弃去洗涤液，在50⁰C水浴上蒸去三氯甲烷。精制的二硫腙置硫酸干燥器中，干燥备用。或将沉淀出的二硫腙用200mL、200mL、100mL三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷层为二硫腙溶液。

⑪二硫腙使用液：取1.0mL二硫腙溶液，加三氯甲烷至10mL混匀。用1cm比色皿，以三氯甲烷调节零点，于波长510nm处测吸光度（A），用下式算出配制100mL二硫腙使用液（70％透光率）所需二硫腙溶液的毫升数（V）；

V=（10（2-1g70））/A=1.55/A       

⑫硝酸-硫酸混合液（4+1）。

⑬铅标准溶液：精密称取0．1598g硝酸铅，加入10mL硝酸（1+99）全部溶解后移入100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg铅。

⑭铅标准使用液：吸取1.0mL铅标准溶液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于10.0μg铅。

四、操作步骤

1、样品消化

称取已搅拌均匀的样品20.0g于500mL凯氏烧瓶中，放数粒玻璃珠，加浓硝酸、浓硫酸各10mL，先以小火缓慢加热，待剧烈作用停止后，加大火力，待内容物开始变棕色时，立即补加浓硝酸，直至溶液透明不再转深为止，继续加热数分钟至浓白烟逸出，冷却后加入20mL蒸馏水，继续加热至浓白烟逸出止，冷却。将内容物转入100mL容量瓶中，用重蒸馏水定容至刻度。同时做空白试验。

2、铅标准曲线的绘制

分别吸取0.00mL、0.10mL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL铅标准使用液（相当0μg/L、1μg/L、2μg/L、3μg/L、4μg/L、5μg/L铅），置于125mL分液漏斗中，各加1％硝酸溶液1mL，加水至20mL。加2mL柠檬酸铵溶液、1mL盐酸羟胺溶液和2滴酚红指示液，用氟水（1+1）调至红色，再各加2mL氰化钾溶液，混匀。各加5.0mL二硫腙使用液，剧烈振摇lmin，静置分层后，三氯甲烷层经脱脂棉滤入1cm比色皿中，以三氯甲烷调节零点，于波长510nm处测吸光度，绘制标准曲线或计算一元回归方程。

3、样品溶液及试剂空白的测定

吸取10.0mL消化后的样品溶液和同量的试剂空白液，分别置于125mL分液漏斗中，各加水至20mL。依铅标准曲线绘制操作顺序进行，最后在波长510nm处测得吸光度值。与铅标准曲线比较定量。

五、结果计算

X=（（A1—A2）×1000）/（m×V2/V1×1000）

式中：X——样品中铅的含量，mg/kg或mg/L；

A1——测定用样品消化液中铅的质量，μg；

A2——试剂空白液中铅的质量，μg；

V₁——测定用样品消化液体积，mL；

V₂——样品消化液的总体积，mL；

m——样品质量（或体积），g（或mL）。

六、说明

①淀粉指示液需临用时配制。

②玻璃仪器均用10％～20％硝酸浸泡24h以上，用自来水反复冲洗，最后用水冲洗干净。

③三氯甲烷不应含氧化物。

检查方法：量取10mL三氯甲烷，加25mL新煮沸过的水，振摇3min，静置分层后，取10mL水液，加数滴碘化钾溶液（150g/L）及淀粉指示液，振摇后应不显蓝色。

处理方法：于三氯甲烷中加入1/10～1/2体积的硫代硫酸钠溶液（200g/L）洗涤，再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏，弃去最初及最后的1/10馏出液，收集中间馏出液备用。

④测定时需加入柠檬酸铵、氰化钾和盐酸羟胺等，目的是防止铁、铜、锌等离子的干扰。

⑤二硫腙-三氯甲烷溶液于冰箱中保存。

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