乳清蛋白粗提粉对斑马鱼骨质疏松症的药效研究（二）

2 结果与讨论

2.1 F-WPC溶液和Z-WPC溶液的最大给药浓度

给药3天内，每天观察并统计斑马鱼死亡数量与毒性情况，确定斑马鱼在Z-WPC与F-WPC作用下的最大耐受剂量。由图1、图2可知，1µg·mL^-1及以下浓度的F-WPC与100µg·mL^-1及以下浓度的Z-WPC作用于斑马鱼72h内的累计死亡率小于10%，对斑马鱼无心包出血、脊柱弯曲等明显发育毒性（图3）。因此，后续实验采用1µg·mL^-1F-WPC、100µg·mL^-1Z-WPC溶液作为最大给药浓度进行研究。

2.2 F-WPC溶液和Z-WPC溶液对斑马鱼头骨矿化面积和骨密度的影响

斑马鱼骨骼染色及定量分析结果（图4、表1）显示，模型对照组的斑马鱼染色面积与累计吸光度与正常对照组相比具有显著性差异，提示造模成功。从图4中可以看出，F-WPC、Z-WPC组各浓度斑马鱼头骨矿化面积与泼尼松龙组比较都相对增加（P值均＜0.05），其中高浓度组增加的最为明显，而F-WPC、Z-WPC各高、中、低相应剂量组之间，无显著性差异。

3 结论与展望

文中F-WPC和Z-WPC均为粉末状的混合物，其中Z-WPC为未精制的粗提物。因为两者所含各种物质的具体比例存在差异，所以，无论根据乳铁蛋白等指标性成分的用量确定剂量，还是选择两者同等重量作为实验用剂量进行比较，都对实际应用时的剂量选择缺乏合理指导作用。

因此，文中选择的剂量是依据安全有效的非毒性剂量作为最大给药剂量。结果可知，1µg·mL^-1F-WPC溶液和100µg·mL^-1Z-WPC溶液对斑马鱼无明显发育毒性，因此抗骨质疏松药效实验选择此浓度作为最大给药浓度进行研究。

乳清蛋白因其生产规模大，可用性高且生物活性片段含量高，已成为很有前途的生物肽来源。美国早在1990年就采用离子交换法从乳清中分离乳清蛋白，而我国目前还没有实现相关产品的生产技术突破。广泛用于配方食品、糖果生产、冰淇淋配料等领域的脱盐乳清粉、乳清浓缩蛋白、乳清分离蛋白和乳糖等乳清制品，主要依靠进口，这不仅制约了我国相应产品在生产和开发方面的发展，也提升了相关产品的生产成本，加重消费者负担，不利于我国乳清蛋白资源的开发利用以及乳品工业的可持续发展。

目前，国内在食品、保健品等领域，对乳清蛋白需求量逐年提升，但受限于技术等原因，乳清蛋白主要依靠进口。文中F-WPC和Z-WPC的抗斑马鱼骨质疏松实验表明，二者均能逆转泼尼松龙诱导的斑马鱼骨量减少，但实现相同程度的作用时，F-WPC所需要的剂量远低于Z-WPC。上述结论在说明Z-WPC效果可靠、有发展前景的同时，提示Z-WPC作为粗提物可以进一步发展纯化产业；也可以从节约生产成本的角度考虑，将Z-WPC粗提物直接作为产品开发的原料。这为我国乳清蛋白产业的发展奠定了研究基础，为我国生产及利用乳清蛋白，延长乳业产业链提供了良好契机。

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