中性氧化铝柱层析分离纯化鲨肝醇制品及其组成分析（二）

发布时间：2022-01-16 17:37 编辑者：特邀作者周世红

2 结果与讨论

2.1 单因素试验结果

2.1.1 洗脱液比例对洗脱过程的影响

上样量3g，洗脱流速2mL/min，研究洗脱液比例(V_二氯甲烷:V_无水甲醇)对中性氧化铝柱分析分离纯化鲨肝醇的作用效果。

由图1可知，鲨肝醇纯度随着洗脱剂比例的减少呈先上升后下降的趋势。在选择洗脱液时，一般先选择极性较小的溶剂，根据分离效果再依次增大极性。本试验中甲醇的极性要大于二氯甲烷。当仅选择二氯甲烷为洗脱剂时，其分离效果要弱于二氯甲烷与甲醇(体积比9:1)复配使用，其原因可能是二氯甲烷的极性弱，无法很好地分离鲨肝醇。而随着甲醇比例的增加，鲨肝醇的纯度不断下降，这是由于复配洗脱剂的极性过强而将部分杂质混入鲨肝醇中。最终选定洗脱剂比例(V_二氯甲烷:V_无水甲醇)为9:1进行优化，此时第7管鲨肝醇纯度最高。

2.1.2 上样量对洗脱过程的影响

洗脱液比例(V_二氯甲烷：V_无水甲醇)为9:1，洗脱流速为2mL/min，研究上样量对中性氧化铝柱分离、纯化鲨肝醇的作用效果。

由图2可知，上样量在1～3g范围，鲨肝醇纯度随上样量的增加而增加，然而上样量继续增加,鲨肝醇纯度呈下降的趋势。这一结论与龚金炎等的研究结果基本一致。分析其原因可能是：当上样量过低时，氧化铝层析柱无法被充分利用而造成浪费，同时洗脱剂消耗量大，使不皂化物中的鲨肝醇与杂质无法有效分离：而当上样量过大时，极易造成氧化铝层析柱负载过大，吸附效率降低。采用上样量3g进行后续优化。此外，在色谱柱负载量0.012g/g氧化铝、上样量3g时，第7管鲨肝醇纯度最高。

2.1.3 洗脱流速对洗脱过程的影响

洗脱液比例(V_二氯甲烷：V_无水甲醇)为9:1，上样量为3g，研究洗脱流速对中性氧化铝柱分离、纯化鲨肝醇的作用效果。

由图3可知，鲨肝醇纯度随洗脱流速的升高呈先增加后减小的趋势。分析原因可能是：在较低洗脱流速下，鲨肝醇在氧化铝层析柱中停留时间变长，而中性氧化铝具有很强的吸附作用，从而导致部分鲨肝醇被吸附在层析柱中而无法被洗脱；当洗脱流速过高时，不皂化物快速流过层析柱而使鲨肝醇与杂质无法有效分离。宋恭帅等认为柱层析洗脱流速在1～2mL/min之间为宜。本研究结果与之一致。最终选定2mL/min为最佳洗脱流速。此外，在洗脱流速为2mL/min时，第7管鲨肝醇纯度最高。

2.2 响应面试验

2.2.1 模型拟合

响应面试验设计及结果见表2。

对表2中数据进行多元二项式回归拟合。得到洗脱液比例A、上样量B、洗脱流速C与鲨肝醇纯度之间的二次多项回归方程为：

鲨肝醇纯度=18.08+0.84A+0.47B-0.84C+0.71AB+0.874AC+1.04BC-2.01A²-1.66B²-2.02C²。

由表3可知，二项式回归方程的F值为35.57，其P值＜0.0001，差异极显著；对方程进行失拟项检验。F值为2.46，其P值为0.2020＞0.05。不显著；从拟合方程的相关系数可见，多元二次方程拟合相关系数高于0.90，因此拟合的回归模型可靠，可用来预测响应值与反应参数之间的关系。此外，A、B、G、A2、B2和C2的P值均小于0.05，说明它们对试验结果影响显著，且洗脱液比例A是影响鲨肝醇纯度的最主要因素。