5种天然植物提取物中4种多环芳烃的HPLC—FLR测定方法（二）

收集液使用旋转蒸发仪浓缩至尽干，氮气吹干，用2mL 88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。

（3）葡萄籽提取物和绿咖啡豆提取物

精确称取0.3～0.59样品(精确至0.00019)于10mL试管中，依次加入3mL超纯水和0.5mL色谱纯乙醇溶液，涡旋、超声使其溶解，再加入2mL色谱纯正己烷，涡旋混匀。在4000r／min、15℃条件下离心5min。

绿咖啡豆提取物用移液枪将上层正己烷转移至圆底烧瓶中，葡萄籽提取物用60℃～80℃水浴加热溶液，使正己烷层溶解，再用移液枪将上层正己烷转移至圆底烧瓶中，用正己烷重复萃取1次，合并正己烷溶液。氮气将正己烷吹干，用2mL88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。

（4）姜黄提取物

精确称取0.4～0.59姜黄素样品(精确至0.000lg)于10mL试管中，用5mL丙酮溶液涡旋提取2min后，用1mL移液枪将上清液转移至100mL圆底烧瓶中，再用5mL丙酮涡旋提取1min，用1mL移液枪将上清液转移至100mL圆底烧瓶中，旋转蒸发仪浓缩至尽干，氮气吹干，3mL正己烷和0.5mL丙酮溶解，样品液待净化。

依次用5mL二氯甲烷、5mL正己烷活化SPE小柱；将待净化液加入SPE小柱，再用2mL正己烷荡洗圆底烧瓶后继续加入；用3mL正己烷淋洗，待淋洗液流完之后继续加人3mL正己烷淋洗；用10mL二氯甲烷洗脱。

收集洗脱液，旋转蒸发仪浓缩至近干，氮气吹干，用2mL 88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。

5、标准溶液配制

（1）多环芳烃标准储备液配制

将多环芳烃标准品配制成浓度约为40mg/kg的标准储备液，—20℃冷冻保存，有效期3年。

（2）多环芳烃标准工作溶液配制

通过多次稀释将多环芳烃标准储备液稀释成浓度约为1.6μg／kg的标准工作液，冷藏保存，有效期1年。

6、结果计算

分别检测标准工作液、样品液和空白试样溶液，积分记录峰面积，采用外标单点定量法，计算得到样品中四种多环芳烃的含量，计算结果保留到小数点后两位。

二、结果与分析

1、仪器方法建立和优化

参照《GB 5009．265—2016食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定》中液相色谱条件，通过多波长扫描方式确定四种目标成分最大吸收波长，并运行检测多环芳烃标准品溶液和样品溶液，确定色谱分离效果。结果表明：国标方法梯度洗脱程序能满足四种多环芳烃成分分离的要求，但各组分的检测波长未达到最优，因此对四种多环芳烃检测波长进行了优化，最终能够实现在满足分离效果的前提下，提高灵敏度。流动相梯度条件如表1所示时，4种多环芳烃标准溶液色谱图，见图1，标准品成分及保留时间见表2。因此色谱柱

Agilent Eclipse PAH C18(4.6×250mm，5μm)；柱温：40℃；检测波长：䓛：激发波长270nm，发射波长385m；苯并(b)荧蒽、苯并(a)蒽、苯并(a)芘：激发波长288nm，发射波长430nm；进样量：100μL；流速：1.5mL／min；运行时间：40min；流动相A：水；流动相B：乙腈。使用表1所示的流动相梯度条件。

2、线性关系,检出限和定量限

按照1.5配制成系列标准工作溶液，按照1.3所述条件进行检测。用分析物峰面积对被测组分的浓度作图，结果见表2。由表2可知，4种多环芳烃在0.0lμg/kg～8.0μg/kg范围内呈良好线性关系，相关系数R²为1.0000。

以3倍和10倍的信噪比(S/N)分别确定了仪器方法的检出限(LODs)和定量限(LOQs)，结果列于表3。4种多环芳烃的仪器方法定量限为0.04μg/kg。

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