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近日,中科院大连化学物理研究所与中国疾病预防控制中心营养所合作,开发了一种新的液相色谱质谱联用方法用于人乳寡糖高通量绝对定量分析,并应用此方法开展了不同民族的人乳寡糖分析。相关研究成果发表于《食品化学》期刊。
母乳对婴儿的生长发育有着作用,不仅提供了必要的营养物质,还能帮助婴儿完善免疫系统,建立健康的肠道菌群。人乳寡糖(HMOs)是母乳中的重要成分,仅次于脂质和乳糖,在婴儿肠道菌群和免疫屏障的建立中发挥着重要作用,此外还能够促进婴儿脑发育、抵抗病毒侵染等。因此人乳寡糖受到越来越多的关注,尤其是在婴儿配方食品的研发生产中。
但是人乳寡糖结构复杂,存在组成变化、序列变化和多种连接异构体,不同个体的人乳寡糖种类和含量差异很大。因此对包括多种异构结构的复杂人乳寡糖进行绝对定量的高通量方法很重要,也非常具有挑战性。
研究团队在此前已经利用在线前处理-液相色谱质谱联用方法成功表征了人乳和动物乳中寡糖的差异性,并且通过排斥亲水作用色谱-质谱联用方法实现了不同血型母亲母乳中寡糖差异性的分析。但是上述方法不能进行高通量检测,因而无法开展大规模调查。
为实现大规模的人乳寡糖表达情况调查,研究团队在已有方法的基础上,将超高效亲水相互作用液相色谱与碰撞诱导解离二级质谱相结合,发展出新的分析方法。超高效亲水相互作用液相色谱具有高效的空间分辨能力,而碰撞诱导解离二级质谱可以进行可靠的结构识别,再加上质谱多反应检测的扫描模式,研究团队成功实现了人乳寡糖的高通量绝对定量分析,定量分析人乳中23种高含量代表性的寡糖用时不到15分钟。
研究团队利用这种方法分析了来自中国4个不同地理区域的5个不同种族的251名母亲的母乳样品中的寡糖成分,并研究了这251名母亲的分泌状态和Lewis血型表型。研究发现,不同民族在寡糖的种类和含量差异性较大。
该项研究为人乳寡糖的大规模群体研究提供了新的方法,有利于更深入地了解不同地理区域、不同种族之间人群的人乳寡糖差异性。
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为进一步分析壳寡糖抗肿瘤活性及其机制,采用酶法制备工艺获取组分清晰的壳寡糖,化酶解条件为酶解时间4h、加酶量120U/g,结合乙醇沉淀、超滤和纳滤联用的工艺获得聚合2~4的壳寡糖。比较评价壳寡糖及其与阿霉素联用对3种肿瘤细胞的抑制效果,其中作用最明显的人乳腺癌MDA-MB-231的细胞生存率降低20%。利用细胞迁移实验和激光共聚焦分析机制,得出壳寡糖可抑制MDA-MB-231细胞迁移并促进阿霉素入核。
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