食品添加剂植酸钠中无机磷含量测定研究（一）

一、前言

植酸钠，又称肌醇六磷酸钠，英文名称：sodiumphytate，常温下为白色粉末，易溶于水。其母体植酸（肌醇六磷酸）是一种广泛存在于植物种子、谷物、胚芽和米糠中的有机磷酸化合物。

植酸及其钠盐具有较强的金属螯合能力，是一种少见的金属多齿螯合剂。这是因为植酸及其钠盐的主要功能基团是六元环结构，有24个氧原子、12和羟基和6个磷酸基，当与金属相遇时，易形成多个螯合环，且所形成的络合物稳定性强。因此，植酸及其钠盐在食品、医药、日化等行业具有广泛的应用价值。植酸钠作为一种食品添加剂，除了要控制其主含量的含量外，还要控制其杂质的含量，无机磷是植酸钠纯品的一种杂质，因此研究植酸钠中无机磷含量的测定方法十分重要。国内目前发布的关于磷检测的经典标准方法。主要是磷钼蓝法和磷钼黄法。前者是利用磷在酸性条件下与钼酸铵结合为磷钼酸铵，在还原剂的作用下被还原成磷钼蓝。后者则是磷在酸性条件下与钒钼酸铵形成磷一钒一钼酸复合体。为提高检测精度，钼蓝法和钼黄法均用分光光度计测定。本文利用植酸与金属离子的螯合作用去除植酸钠的基质影响，再用钼黄法进行检测无机磷含量。当添加浓度为0.02％～0.08％，回收率范围在99.0％～102.48％之间，相对标准偏差在1.03％～1.16％之间，方法学指标满足《GB/T27404—2008实验室质量控制规范食品理化检测》的要求。

二、试验部分

1、实验原理

在酸性条件下，加入三氯化铁溶液的植酸钠溶液中的正磷酸盐与钒钼酸生成黄色的磷钒钼酸配合物，用分光光度计在420nm处测其吸光度值，根据标准曲线计算样品中无机磷含量。

2、仪器和设备

高速冷冻离心机（Eppendoff-5430R，德国Eppendorf公司）1分光光度计（TU—1901，北京普析通用仪器有限责任公司）。

3、试剂和材料

（1）钒钼酸铵溶液

称取40g钼酸铵［（NH₄）₆MO₇O₂₄·4H₂O］溶于400mL水中，得到溶液A。称取1.0g偏钒酸铵（NH₄VO₃），溶于300mL水和80mL浓硫酸的混合溶剂中，得到溶液B。将溶液A加入溶液B中，用试剂水稀释至1L。

（2）10g/L三氯化铁溶液

称取1g三氯化铁，加入适量水溶解，并用水定容至100mL；

（3）磷酸盐标准储备液

称取4.3865g于105℃干燥1h的磷酸二氢钾标准试剂，溶于100mL水中，并转移到1L容量瓶中，用试剂水稀释至刻度，摇匀，此溶液浓度为1.0mL。
（4）磷酸盐标准工作液

准确吸取10.0mL标准储备液，至100mL容量瓶中，用试剂水稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为0.10mg/mL。

4、实验步骤

（1）磷酸盐标准曲线绘制

分别移取0μL、50μL、100μL、200μL、500μL、1000μL、2000μL磷标准工作溶液，加入200μLFeCl₃溶液，加水至20mL，加入10mL钒钼酸铵溶液，摇匀，静置2min后于420nm处分别测其吸光度。

（2）试样制备

称取1g试样，精确至0.001g，加20mL水溶解，加入2mLFeCl₃溶液，加水定容至50mL；于10℃、7500r/min离心5min。取5mL上清液，15mlL水，加入10mL钒钼酸铵溶液，摇匀，静置2min后于420nm处测其吸光度。

三、结果与讨论

1、经典方法验证

钼蓝法和钼黄法只是在显色反应上有所差别，本文首先使用钼蓝法进行测定。称取试样0.1g，精确至0.01g，置于25mL比色管中，加5mL水，用20％硝酸溶液中和至pH=7（pH试纸检验）。加1mL硫酸溶液（1+6），1mL浓度为25g/L的钼酸铵溶液，1mL浓度为100g／L的抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，于冰浴（0～5℃）中放置30min后取出，用分光光度计在680nm处测其吸光值。分别配制浓度为：0、0.0025mg/mL、0.005mg/mL、0.0075mg/mL、0.01mg/mL、0.0125mg/mL磷溶液，与样品同样处理，绘制标准曲线。

经检测样品重复性实验结果较好，所选取的样品检测结果均为未检出（＜0.02％），但向样品中添加0.02％、0.04％磷标准溶液，发现回收率为0，方法特异性差，添加回收实验现象如图所示。图1中图右1～4号比色管即为添加和样品，并无差异。钼黄法情况基本一致。疑为植酸钠样品基质影响磷钼蓝或磷钼黄的形成。拟去除植酸钠样品基质进行检测。

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