北方伟业计量集团有限公司
为探究水冬瓜根皮中的化学成分,本文基于HPLC-HESI-HRMS方法对水冬瓜根皮中化学成分进行了分析与推测。采用ThermoFisher Hypersil GOLD aQ C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm),以0.1%甲酸水-乙腈(0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min-1,柱温:40 ℃;质谱使用HESI离子源,正离子和负离子模式下采集数据,质量扫描范围m/z:100~1500 Da,结合Compound Discoverer 3.0数据库及相关文献数据分析水冬瓜根皮的主要化学成分。结果表明,通过高分辨质谱正、负离子质谱信息及相关文献数据对照,共推断出36个化合物,包括10个有机酸类化合物,4个生物碱类化合物,1个氨基酸类化合物,2个苯丙素类化合物,2个酯类化合物,2个萜类化合物,2个芳香含氧衍生物类化合物,4个酰胺类化合物,9个其他类化合物。HPLC-HESI-HRMS方法为水冬瓜根皮药材的质量控制提供技术支持,为阐明水冬瓜根皮药材的药效物质基础提供了有力的数据依据。
水冬瓜根皮来源于山茱萸科植物有齿鞘柄木Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu的干燥根皮,别名大接骨丹。中华本草(苗药卷)记载山茱萸科植物有齿鞘柄木Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu来源于根、根皮、树皮和叶,以根皮入药,该药材同时被诸多本草所收载。相关研究表明,大接骨丹药材中主要含有β-谷甾醇、7-羟基-3-乙基苯酚、3β-甲氧基-豆甾-7-烯、谷甾烷、(E)-对甲基苯丙烯醛、豆甾-7-烯-3-醇、邻,对-二甲氧基苯甲酸、β-胡萝卜苷、熊果酸、正十八烷酸、二十二烷酸、7-羟基-6-甲氧基香豆素、硬脂酸、软脂酸、syringo ylglycerol、2H-1-benzopyr-an-2-one、3,5-二甲氧基苯甲醛、9H-pyrano[2,3-f]-1,4-benzodio xin-9-one、7-羰基-β-胡萝卜苷、10-griselinosidic acid、丁香树脂酚、豆甾醇、3,4,5,7-四羟基-苯乙酸、豆甾-5,11-二烯-3β-醇、22,23-二氢豆甾醇、26,27-dinor-4,4-dimethyl-cholesta-8,14-dien-3-ol、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛、Griselinoside、紫丁香苷、Coniferin、Quercetin-3-O-glucoside、Astragalin、Phytol。
液质联用技术,在快速推断中药、民族药化学成分具有快速、科学、可靠、绿色等优点,同时,也被广泛应用于食品中农残快速检测、水产品安全监测、保健功能食品活性成分快速分析等。当前,针对贵州特色民族药水冬瓜根皮研究,除上述化学成分外,主要集中在生物活性、工艺优化、近红外快速检测、质量分析及指纹图谱等,尚未针对水冬瓜根皮药材化学成分LC-HRMS相关研究,因此,本试验拟以水冬瓜根皮药材为研究样本,采用HPLC-HESI-HRMS技术,对水冬瓜根皮药材甲醇提取物中的主要化学成分进行推断分析,为阐明水冬瓜根皮的药效物质基础提供参考。
1材料与方法
1.1材料与仪器
乙腈(色谱纯500 mL,西陇化工股份有限公司),甲酸(AR500 mL,天津市恒兴化学试剂制造有限公司),甲醇(AR500 mL,重庆江川化工(集团)有限公司),水为超纯水(自制),其他试剂均为分析纯。水冬瓜根皮药材自采于贵州省都匀市杉木湖沟渠(经度:26°15′46.16″N;纬度:107°30′52.33″E,海拔807 m),药材经笔者推断出为山茱萸科植物有齿鞘柄木Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu的根皮。
Thermo Scientific Q Exactive Focus高分辨Orbitrap质谱仪(Thermo Fisher Scientific),Dionex Ultimate 3000 RSLC液相仪(Thermo Fisher Scientific),分析软件:Compound Discoverer 3.0,Sartorius BT25S电子天平(十万分之一,德国塞多利斯公司),烘箱(天津市泰斯特101-3AB型),水浴锅等。
1.2 实验方法
1.2.1 供试品溶液的制备
自采药材烘箱60℃下烘干,粉碎机粉碎后过65目筛[筛孔平均内经(250±9.9)μm],混匀,备用。称取药材粉末约0.5 g,精密称定,置100 mL圆底烧瓶中,精密加入甲醇100 mL,回流提取1 h,放冷,过滤于100 mL量瓶中,用甲醇补足滤液至刻度,摇匀。滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。
1.2.2 液相检测条件
色谱柱:ThermoFisher Hypersil GOLD aQ C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm),流速:0.3 mL.min-1,柱温:40 ℃,进样量:5μL,采用梯度洗脱,流动相B为0.1%甲酸水溶液,C相为乙腈(0.1%甲酸),具体洗脱条件:0~2min:95%B;2~42min:95%~5% B;42~47min:5% B;47~47.1min:5%~95% B;47.1%~50min:95% B。
1.2.3 HRMS质谱条件
采用热电喷雾离子源(HESI);扫描模式:正负离子模式同时采集Full MS-ddms2;质量扫描范围m/z :100Da~1500 Da;频谱数据类型(Spectrum data type):Profile;数据分辨率(Resolution):Full MS: 70000;MS/MS: 17500;自动增益控制数量(AGC target):Full MS:1e6,MS/MS:2e5;最小注入时间(Maximum IT):100 ms(Full MS),50 ms(MS/MS);循环计数(Loop count):3;MSX计数(MSX count):1;隔离宽度(Isolation width):1.5m/z;NCE(阶梯NCE):20,40,60;最小AGC目标(Minimum AGC target):8e3;强度阈值(Intensity Threshold):1.6e5;喷雾电压:正离子3.0kV;负离子2.5 kV;鞘气(sheath gas flow rate):35;辅助气(aux gas flow rate):10;吹扫气(sweep gas flow rate):0;离子传输管温度(capillary temp):320℃。
1.3数据处理
数据采集通过赛默飞世尔U3000UPL液相色谱串联Q Exactive Focus Orbitrap高分辨质谱仪,并采用Thermofish Scientific公司化合物分析软件 Compound Discoverer 3.0进行定性分析,通过软件内中药材数据库及mZcloud数据库匹配可推测化合物的类型。
2结果与分析
2.1 LC-MS成分检测
采用HPLC-HESI-HRMS对苗药水冬瓜叶药材中的化学成分进行定性分析,(+)HESI-MS和(-)HESI-MS的质谱总离子图(TIC)见图1。
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