基于HPLC-HESI-HRMS的水冬瓜根皮化学成分分析（三）

2.3.2 生物碱类化合物

从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出4个生物碱类化合物，其中化合物11，12，13，14分别为腺苷、Cyclo(phenylalanyl-prolyl)、Methyl N-[5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl]carbamate、Tridemorph，这4个化合物结构相似，均为生物碱类化合物。

分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物11在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为268.10437，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去糖链（C5H10O4）形成特征碎片离子m/z 136.06204 [M-C5H10O4]+，符合腺苷的裂解规律；

化合物12在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为245.12880，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子NH3或脱去一分子CO2分别形成特征碎片离子m/z 227.11772 [M-NH3]+或m/z 203.11798 [M-CO2+H]+；

化合物13在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为336.10820，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CO2或脱去一分子CH3COONH2分别形成特征碎片离子m/z 292.09766 [M-CO2+H]+、m/z 260.09247 [M-CH3COONH2]+；

化合物14在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为298.31061，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3(CH2)11CH3后，N环形成特征碎片离子m/z 115.09944 [M-CH3(CH2)11CH3]。

2.3.3 氨基酸类化合物

从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出1个氨基酸类化合物，化合物15为L-亮氨酸。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物15在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为132.10223，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CO2形成特征碎片离子m/z 86.09720 [M-CO2+H]+，与文献报道L-亮氨酸的特征碎片离子m/z 86.2一致，符合L-亮氨酸的裂解规律。

2.3.4 苯丙素类化合物

从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出2个苯丙素类化合物，其中化合物16，17分别为BMK methyl glycidate、肉桂醛，这2个化合物结构相似，均为苯丙素类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物16在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为193.08610，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子H2O与一分子CO2形成特征碎片离子m/z 131.04926 [M-CO2-H2O+H]+；

化合物17在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为133.06503，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CO或脱去一分子甲醛形成特征碎片离子m/z 105.07033 [M-CO+H]+、m/z 103.05461 [M-HCHO+H]。

2.3.5 酯类化合物

从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出2个酯类化合物，其中化合物18，19分别为Trimethyl trimellitate、Bis(2-ethylhexyl)adipate，这2个化合物结构相似，均为酯类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物18在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为253.07085，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子H2O与一分子CO或脱去一分子乙酸或脱去两分子乙酸分别形成特征碎片离子m/z 207.02899 [M-CO-H2O+H]+、m/z 193.04967 [M-CH3COOH+H]+、m/z 133.02855 [M-2CH3COOH+H]+；

化合物19在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为371.31570，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3(CH2)3CH(CH2CH3)CH2OH或脱去两分子CH3(CH2)3CH(CH2CH3)CH2OH分别形成特征碎片离子m/z 241.18062 [M-CH3(CH2)3CH(CH2CH3)CH2OH+H]+、m/z 111.04444 [M-2CH3(CH2)3CH(CH2CH3)CH2OH+H]。

2.3.6 萜类化合物

从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出2个萜类化合物，其中化合物20，21分别为断氧化马钱苷、马兜铃酮，这2个化合物结构相似，均为萜类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物20在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M-H]-为403.12503，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3OH形成特征碎片离子m/z 371.09811 [M-CH3OH-H]-，其准分子离子峰脱去醚键左侧一分子C6H11O5形成特征碎片离子m/z 241.07170 [M-C6H11O5]-，又失去一分子H2O形成特征碎片离子m/z 223.06068 [M-C6H11O5-H2O]-，接着又失去一分子CO2或一分子CH3OH，分别形成特征碎片离子m/z 179.07065 [M-C6H11O5-CO2]-或m/z 191.03514 [M-C6H11O5-CH3OH]-；

化合物21在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为219.17458，在二级质谱中，MS/MS特征碎片离子m/z 203.14403、m/z 91.05507与文献报道的m/z 203、m/z 91相符，化合物22为马兜铃酮。

2.3.7 芳香含氧衍生物类化合物

从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出2个芳香含氧衍生物类化合物，其中化合物22，23分别为3,5-di-tert-Butyl-4-hydroxybenzaldehyde、Diisobutylphthalate，这2个化合物结构相似，均为芳香含氧衍生物类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物22在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为235.16948，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子H2O或脱去一分子H2O与一分子CO或脱去两分子CO分别形成特征碎片离子m/z 217.12384 [M-H2O+H]+、m/z 189.03033 [M-H2O-CO+H]+、m/z 179.10675 [M-2CO+H]+；

化合物23在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为279.15936，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH(CH3)2CH2OH或脱去一分子CH(CH3)2CH2OH与一分子CO分别形成特征碎片离子m/z 205.08472 [M-CH(CH3)2CH2OH+H]+、m/z 149.02345 [M-CH(CH3)2CH2OH-CO+H]。

2.3.8 酰胺类化合物

从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出4个酰胺类化合物，其中化合物24，25，26，27分别为Palmitoyl ethanolamide、Hexadecanamide、Stearamide、Oleoyl ethylamide，这4个化合物结构相似，均为酰胺类化合物。

分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物24在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为300.28992，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子H2O或脱去一分子H2O与一分子CO2分别形成特征碎片离子m/z 282.27850 [M-H2O+H]+、m/z 238.06746 [M-H2O-CO2+H]+；

化合物25在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为256.26370，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CO或脱去一分子H2O与一分子CO或脱去一分子CH3(CH2)5CH3或脱去一分子CH3(CH2)9CH3或脱去一分子CH3(CH2)11CH3分别形成特征碎片离子m/z 228.13831 [M-CO+H]+、m/z 210.03716 [M-H2O-CO+H]+、m/z155.05942 [M-CH3(CH2)5CH3]+、m/z 100.07642 [M-CH3(CH2)9CH3+H]+、m/z71.08627 [M-CH3(CH2)11CH3]+；

化合物26在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为284.29514，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3(CH2)12CH3或脱去一分子CH3(CH2)13CH3或脱去一分子CH3(CH2)14CH3分别形成特征碎片离子m/z 85.10201 [M-CH3(CH2)12CH3]+、m/z 72.04524 [M- CH3(CH2)13CH3+H]+、m/z 57.07080 [M-CH3(CH2)14CH3]+；

化合物27在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为310.31052，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3(CH2)7CH=CHCH2CH3或脱去一分子CH3(CH2)7CH=CH(CH2)2CH3或脱去一分子CH3(CH2)7CH=CH(CH2)5CH3或脱去一分子CH3(CH2)7CH=CH(CH2)6CH3分别形成特征碎片离子m/z 142.12238 [M-CH3(CH2)7CH=CHCH2CH3+H]+、m/z 128.10721 [M-CH3(CH2)7CH=CH(CH2)2CH3+H]+、m/z 85.05311 [M-CH3(CH2)7CH=CH(CH2)5CH3+H]+、m/z 72.08159 [M-CH3(CH2)7CH=CH(CH2)6CH3+H]。

2.3.9 其他类化合物

从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出9个其他类化合物，其中化合物28，29，30，31，32，33，34，35，36分别为Dodecyl sulfate、4-Dodecylbenzenesulfonic acid、Myristyl sulfate、Triphenyl phosphate、Tris(2-butoxyethyl) phosphate、Glycerophospho-N-palmitoyl ethanolamine、Citroflex 4、Citroflex 4、1,2-Cyclohexane dicarboxylic acid diisononyl ester。

分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物28在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M-H]-为265.14810，在二级质谱中，其准分子离子峰烃与氧断开，脱去一分子H3C(CH2)10CH3形成特征碎片离子m/z 96.95894 [M-H3C(CH2)10CH3]-；

化合物29在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M-H]-为325.18460，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去一分子H3C(CH2)8CH3形成特征碎片离子m/z 183.01149 [M-H3C(CH2)8CH3-H]-；

化合物30在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M-H]-为293.17953，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去一分子H3C(CH2)12CH3形成特征碎片离子m/z 96.95892 [M-H3C(CH2)12CH3-H]-；

化合物31在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为327.07849，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去一分子C6H5OH形成特征碎片离子m/z 233.03616 [M-C6H5OH+H]+；

化合物32在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为399.25095，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去三分子CH3(CH2)2CH3或脱去一分子CH3(CH2)2OCH2CH3或脱去两分子CH3(CH2)2OCH2CH3分别形成特征碎片离子m/z 225.08896 [M-3CH3(CH2)2CH3+H]+、m/z 299.16177 [M-CH3(CH2)2OCH2CH3+H]+、m/z 199.07320 [M-2CH3(CH2)2OCH2CH3+H]+；

化合物33在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为454.29321，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去一分子H2O形成特征碎片离子m/z 436.28110 [M-H2O+H]+；

化合物34在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为403.23337，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子O(CH2)3CH3与丢失一分子(CH2)3CH3缩合成含二酮的五元环醚，形成特征碎片离子m/z 273.09760 [M-O(CH2)3CH3-(CH2)3CH3+H]+，其准分子离子峰脱去两分子丁基及氧O(CH2)3CH3形成特征碎片离子m/z 259.15393 [M-2O(CH2)3CH3+H]+，其准分子离子峰脱去三分子O(CH2)3CH3并补H形成特征碎片离子m/z 185.08092 [M-3O(CH2)3CH3+H]+；

化合物35在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为361.22223，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去两分子丁基及O(CH2)3CH3形成特征碎片离子m/z 213.07573 [M-2C4H10O+H]+，其准分子离子峰脱去三分子丁基及O(CH2)3CH3形成特征碎片离子m/z 139.00267 [M-3C4H10O+H]+；

化合物36在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z [M+H]+为425.36270，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3CH(CH3)(CH2)6OH形成特征碎片离子m/z 281.21057 [M-CH3CH(CH3)(CH2)6OH+H]。

3 结论与讨论

预实验过程中，比较正、负离子模式下总离子图时，发现水冬瓜根皮中化学成分在正、负离子模式下均有较好的响应值，可能与Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu所含化学成分类型丰富相关，化学成分种类推断出结果表明其含有机酸类、生物碱类、氨基酸类、苯丙素类、酯类化、萜类、芳香含氧衍生物、酰胺及其他类化合物，研究结果证实了预实验水冬瓜根皮中化学成分在正、负离子模式下均有较好的响应值的原因。

课题组建立了水冬瓜根皮甲醇提取物的HPLC-HESI-HRMS快速分析方法，结合Compound Discoverer 3.0数据库及相关文献数据，初步推断出出水冬瓜根皮甲醇提取物中36个化学成分，包括10个有机酸类化合物，4个生物碱类化合物，1个氨基酸类化合物，2个苯丙素类化合物，2个酯类化合物，2个萜类化合物，2个芳香含氧衍生物类化合物，4个酰胺类化合物，9个其他类化合物。

本试验采用液质联用技术对黔产水冬瓜根皮中化学成分进行快速鉴别研究时，发现黔产水冬瓜根皮与文献[7-10]湖北恩施自治州、云南丽江等大接骨丹药材中成分呈现显著性地域差异特征。Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu化学成分的差异可能与植物生长的地理位置、土壤、温度、水分、海拔高度等密切相关，导致Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu植物体二次代谢产物差异性较大，相关研究有待进一步深入。

相关链接：腺苷，氨基酸，甲醇