脱糖大豆粉末磷脂中磷脂酸的分离（一）

磷脂酸(简称为PA)是一种二酰基甘油磷脂，也是细胞膜的组成成分之一，PA分子内含有甘油骨架，其中sn-1和srt-2羟基被脂肪酸酯化，St／-3位被磷酸基团取代。研究发现PA具有促进细胞有丝分裂、引起肌肉收缩、促进激素分泌等生物学功能，在食品、药品和化妆品等多个领域具有重要的应有价值。大豆磷脂富含PA成分，含量约为5％～15％，是制备PA的主要商业来源。目前PA的制备方法主要有三种，即溶剂法、酶法与化学合成法。陶银华等使用乙醇与甲醇依次萃取大豆粉末磷脂，之后使用体积比为1:4的正己烷-甲醇进行液液萃取，经锌离子处理得到含量为98％的PA产品，回收率较低，为10％。TsutomuNishide等通过磷脂酶D水解磷脂酰胆碱制备PA，可得含量80％以上PA产品，但磷脂酶D较为昂贵。陈福明等使用化学合成的方法，以双硬脂酸甘油脂为原料，与五氧化二磷反应后得到粗磷脂酸，溶于低碳醇、酮、石油醚等溶剂后重结晶纯化，干燥后可得含磷量在3.5％以上的磷脂酸产品，该法反应条件要求较高，工艺复杂。

本文用酸性乙醇提取脱糖磷脂中的PA，提取液经冷冻沉淀后，通过调节pH得到PA产品。该方法具有工艺简单的特点，易于规模化制备PA。

一、材料与方法

1、原料与试剂

大豆粉末磷脂(SPO)，江苏省曼氏生物科技有限公司；脱糖大豆粉末磷脂，实验室自制；正己烷、无水乙醇、氨水、盐酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；正己烷、异丙醇，色谱纯，国药集团化学试剂有限公司；PA标准品，美国sigma公司。

2、仪器与设备

EL204-IC电子分析天平：MettlerToledo仪器有限公司；RE-52A型真空旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；SHZ-D(III)水循环式真空泵：巩义市予华仪器有限公司；Waters1525高效液相色谱仪(蒸发光检测器)：美国沃特世公司；HH-4恒温水浴锅：常州市金坛区环宇科学仪器厂；DKZ系列电热控温振荡水浴锅：常州金坛精达设备有限公司；KH5200DE型超声清洗器：上海冠特超声仪器有限公司；ZK-072型真空烘箱：上海市实验仪器总厂。

3、实验方法

（1）PA提取实验

准确称取脱糖磷脂10.00g于500mL锥形瓶中，按一定料液比加入一定酸醇比的酸性乙醇(V25％HCI:V无水乙醇来表示酸醇比)，升温到一定温度搅拌一定时间后，过滤。将酸提液在-20℃下冷冻4h时间，滤去沉淀后，使用氨水调清液pH至沉淀析出，取沉淀溶于一定量正己烷中，充分搅拌后滤去不溶物，滤液经旋转蒸发脱溶后得PA产品。

（2）HPLC分析

样品配置：用流动相溶解得到浓度为3mg／mL的样品溶液，经0.221μm膜过滤，采用外标法进行HPLC检测。

HPLC条件：色谱柱：Si-60(250mm×4.6mm，5μm)；柱温：30℃。检测器：蒸发光检测器，漂移管温度：55℃。进样量：10μL。流动相为正己烷：异丙醇：1％乙酸(8:8:1，v／V／V)，流速：1.0mL／min。

PA标准溶液的配置：准确称取10.0mg质量的PA于5mL容量瓶中，使用流动相溶解并定容。取上述溶液分别稀释为0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0mg／mL的标准溶液。

（3）回收率的计算

PA回收率的计算见下式：

二、结果与分析

1、PA含量的测定

标准样品、原料和产品的HPLC图见图1、图2和图3，由图1可见PA的保留时间为7.6min，图2、图3中保留时间为7.6min的峰为PA。

以PA含量为横坐标，积分面积为纵坐标绘制标准曲线，浓度范围为0.2～2.0mg／mL，回归方程为Y=6704241.57x-181158.33，R2=0.998，结果表明，PA在浓度范围为0.2～2.0mg／mL之间呈良好的线性关系，标准曲线见图4。

分析原料中的PA含量为9.3％。
 

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