牛至混悬剂对鸡体内外抗氧化性研究

家禽生产过程中，可能会由于饲粮中存在的问题，如温度、光照和通风不足、肠道菌群的失衡、饲用抗生素的滥用及细菌或病毒感染等因素产生氧化应激，并因此受到不同程度的氧化损伤[1]。氧化应激是动物体内存在的过氧化物和自由基数量超过了其抗氧化能力。在氧应激中家禽激活机体复杂的调节机制，消耗了自身生长或生产所需要的大量能量来防御氧化损伤，这将导致家禽养殖成本的增加，生产性能或产品品质下降。为了提高机体抗氧化能力，在家禽饲粮中添加抗氧化物质是重要的有效缓解氧化应激损伤的手段之一。

牛至有效成分牛至精油被证实具有较强的抗氧化活性，能促进家禽生产。生产牛至精油类产品，可使用超临界流体进行提取，然后进行包膜处理，工艺复杂，成本高，主要原因为牛至精油不溶于水，易容于有机溶剂，很难用水浸出。林霜霜研究显示牛至水提取物抗氧化能力低于有机溶剂提取物。也有相反的结论，早克然·司马义研究牛至水提取物比醇提取物具有显著的体外清除自由基能力。可能的解释是，牛至中即含有水溶性和也含精油类脂溶性抗氧化成分。β-环糊精具有“内亲油，外亲水”的空腔结构，具有促进植物中非极性小分子的溶出作用。把牛至粉浸泡于1%β-环糊精水溶液中，制成牛至1%β-环糊精混悬剂，通过体外和体内实验，评测牛至1%β-环糊精混悬剂抗氧化能力，为牛至产品的开发提供新的思路。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验动物

2020年9月9日至2020年10月14日，在北京王家磨养殖场选择160只40日龄北京柴鸡。

1.1.2药品

牛至，购自玉林市玉州区菩提药源食品经营部。

1.1.3主要试剂

2，2-联氮基-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐（ABTS）、甲醇（分析纯），均购自国药集团化学试剂有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒、丙二醛（MDA）含量检测试剂盒，均购自北京索莱宝科技有限公司。

1.1.4主要仪器

分级超细连续式水冷粉碎机（DLF-555），购自温州顶历医疗器械有限公司；超声清洗机（KQ-500DV），购自昆山市超声仪器有限公司；高速离心机（GT10-1），购自北京时代北利离心机有限公司；多功能酶标仪（SpectraMaxi3X），购自美谷分子仪器（上海）有限公司。

1.2方法

1.2.1牛至混悬剂的制备

将牛至干燥，粉碎，过100目筛，得牛至粉。精确称取牛至粉末20g，置玻璃瓶中，量取500ml1%β-环糊精溶液，密封，40℃超声40min，210℃灭菌20min，得牛至混悬剂。

1.2.2牛至甲醇提取液

精确称取牛至粉0.20g，置离心管中，量取甲醇5ml，密封，40℃超声40min，离心取上清液，得牛至甲醇提取液。

1.2.3体外抗氧化能力

供试品溶液的制备：分别精密量取牛至混悬剂和甲醇提取液1ml，置10ml容量瓶中，用甲醇定容，混匀，取适量10000r/min离心10min，得供试品溶液。ABTS自由基溶液配制：精密称取ABTS试剂200mg，用蒸馏水定容至50ml容量瓶中，再精密称取35mg过硫酸钾，用蒸馏水定容至50ml容量瓶中，摇匀后与ABTS水溶液混合，在室温黑暗处反应12～16h，得ABTS自由基储备液。再用甲醇稀释ABTS自由基储备液，使其在734nm吸光度值为0.90±0.02，即得ABTS自由基溶液。依次吸取0、2、4、8、16、32µl供试品溶液置96孔板中，依次加入甲醇70、68、62、54、38µl，混匀，分别加入ABTS自由基溶液140µl，避光室温，反应6min，734nm测定吸光值，平行3次。根据以下公式计算ABTS自由基清除率，并计算出半数抑制率IC50值。

 
式中：I为供试品溶液对ABTS自由基的清除率；A0为ABTS自由基空白对照的吸光度值；AS为供试品溶液与ABTS自由基反应后的吸光度值。

1.2.4试验动物分组与给药

北京柴鸡按体重随机分为对照组和试验组，每组两个重复，每个重复40只北京柴鸡。每组北京柴鸡置50m2栏中散养。对照组饲喂基础饲粮，参照NRC(1994）蛋鸡的营养需要配制，试验组每0.6kg基础饲粮添加100ml牛至混悬剂，进行拌饲给药。试验期间动物自由采食和饮水。试验为期35d，其中前7d为预试期，各组均饲喂基础饲粮，正试期28d，按组别饲喂各组饲粮。

1.2.5血清中SOD活性检测和MDA含量测定

在正试期的第28d从各重复中选取5只试验北京柴鸡，翅下静脉采血3ml，静置1h后于4000r/min离心10min，分离血清，采用试剂盒法测定血清MDA含量和SOD活性。

1.2.6统计学分析

采用SPSS21.0软件对试验数据进行统计分析，试验数据以“平均值±标准差”表示，采用t检验对实验结果进行差异显著性分析，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

2结果与分析

2.1牛至混悬剂清除ABTS自由基的能力

ABTS在过硫酸钾作用下被氧化成绿色的ABTS自由基，抗氧化物抑制ABTS自由基的产生，使得绿色变淡，因此在734nm处测量加入抗氧化物质前后ABTS自由基的吸光度值变化，可以计算出样品的总抗氧化能力。牛至混悬剂和甲醇提取液对ABTS自由基的清除能力结果见表1。

在测量范围内，随着牛至混悬剂和甲醇提取液浓度的增加，对ABTS自由基的清除能力都呈现出对数增加，半数抑制率IC50分别为0.124mg/ml和0.157mg/ml。牛至混悬液对ABTS自由基的清除能力略高于牛至甲醇提取液，但统计学检测差异不显著。

2.2牛至混悬剂对北京柴鸡血清抗氧化指标的影响

注：同列数据进行比较，大写字母完全不同表示差异极显著（P<0.01)

由表2可知，与对照组相比，饲粮添加牛至混悬剂极显著降低北京柴鸡血清MDA含量和极显著提高血清SOD活性。

3讨论

3.1牛至混悬剂鸡体外抗氧化能力

牛至混悬剂对ABTS自由基的清除能力高于牛至甲醇提取液。β-环糊精促进了牛至中挥发油成分的溶出，提高了水溶液的抗氧化水平。

3.2牛至混悬剂鸡体内抗氧化能力

生物体内，氧化应激过程中产生的自由基作用于脂质发生过氧化反应，其氧化终产物MDA，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。MDA含量是反映机体抗氧化潜在能力的重要参数，可以反映机体脂质过氧化速率和强度，也能间接反映组织过氧化损伤程度。SOD是机体代谢所产生内源性抗氧化酶，清除机体产生的自由基，活性高低可反应机体抗氧化的防御能力。北京柴鸡用牛至混悬剂按照每0.6kg饲粮添加100ml悬液，进行拌饲给药能及显著提高血清中SOD活性和降低MDA含量，具有良好的抗氧化应激作用。

4结论

牛至混悬剂制备简单，体外抗氧化活性高于牛至甲醇提取物，能极显著增加家禽抗氧防御能力，减少家禽的氧化应激损伤。可以作为植物抗氧化制剂在畜牧养殖中进行推广。

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