超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中30种食品添加剂（一）

目的建立食品中30种食品添加剂同时检测的超高效液相色谱-串联质谱法。方法样品经甲醇-乙腈-水(1∶1∶1，V/V/V)溶液提取，离心，超高效液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

结果在0.05mg/kg～1.0mg/kg线性内，各物质线性相关系数均>0.99。酸性红、诱惑红、喹啉黄、专利蓝、纳他霉素、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖苷、纽甜的定量限为0.05mg/kg，柠檬黄、日落黄、新红、胭脂红、苋菜红、赤藓红、亮蓝、靛蓝、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、丁基羟基茴香醚、2，6-对二叔丁基对甲酚、特丁基对苯二酚、没食子酸丙酯的定量限为0.1mg/kg。白酒、番茄酱、葡萄干和鱿鱼干4种基质加标回收率为60%～120%，相对标准偏差均<10%。结论本方法适用于食品中30种食品添加剂的快速检测，可满足日常检验工作需要。

食品添加剂的合理使用是保障食品安全的重要举措，随着现代食品工业的快速发展，食品添加剂的地位日益突出，滥用甚至违法使用食品添加剂的情况时有发生，严重影响人们的健康。由于食品添加剂种类繁多，其检测的国家标准仅有针对某一类食品中的一种、几种或者一类添加剂进行检测，日常检验工作需要耗费大量资源和时间，无法满足目前大批量的食品安全监管需求，因此高通量快速检测方法的开发成为目前主要的研究方向。食品添加剂的检测方法有光谱法、气相色谱法、气相色谱质谱法、离子色谱法、液相色谱法和液相色谱串联质谱法]等，超高效液相色谱/串联质谱(ultraliquidchromatography-massspectrometry，UPLC-MS/MS)由于分析速度快，分离效率高、灵敏度高、专一性强等优点被广泛关注，逐渐成为微量、痕量分析的首选方法。尽管文献资料时有报道食品添加剂高通量检测方法，但其研究基质较为单一，如饮料、蜜饯等，目前暂无全基质中多类别食品添加剂高通量快速检测的相关报道。

本研究针对日常食品安全监管主要监控的常见添加剂合成着色剂(12种)、甜味剂(7种)、抗氧化剂(4种)、防腐剂(7种)进行检测。目前这些化合物共涉及相关检验标准十多个，需要采取不同的检测系统来进行，检测专属性不够强且有时灵敏度无法满足违法使用添加剂的检测需求，同时涉及到的食品基质类别都为复杂，常见的监测种类包括如肉制品、水产制品、粮食制品等，其中的脂肪、蛋白质、糖类甚至调味品的含量各不相同，而且这些复杂组分还会干扰测定。因此，本文围绕日常监督所需，针对常见食品基质建立通用的前处理方法，开发一个能同时检测上述化合物的高通量快速定量分析方法，从而大大节约实验室的资源，提高工作效率，对食品中的添加剂进行有效的监测。

1材料与方法

1.1仪器与试剂

WatersAcquityBSM/XEVOTQ-S超高效液相色谱-串联质谱仪(配有电喷雾离子源及Masslynx4.1SCN803软件，美国Waters公司)；X1R高速冷冻离心机(美国Thermo公司)；Millipore超纯水处理系统(美国Merck-Millipore公司)。标准物质：山梨酸、诱惑红、赤藓红购自AccuStandard；特丁基对苯二酚(TBHQ)、脱氢乙酸购自ChemSer；苯甲酸、胭脂红、丁基羟基茴香醚(BHA)、新红、柠檬黄、靛蓝、2，6-对二叔丁基对甲酚(BHT)、喹啉黄、三氯蔗糖购自Dr.EGmbH；没食子酸丙酯(PG)、酸性红、亮蓝、纽甜、专利蓝购自Sigma；安赛蜜、阿斯巴甜购自Supelco；对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苋菜红、糖精钠、日落黄购自中国食品药品检定研究院；纳他霉素购自USP；甜蜜素购自农业部标准物质中心；甜菊糖苷购自J&K。试剂：甲醇(色谱纯，批号：0000218275)、乙腈(色谱纯，批号：0000228948)、乙酸铵(色谱纯，批号：54450100)。

1.2方法

1.2.1混合对照品制备

标准储备液(1.0mg/ml)：分别称取上述标准物质各10mg，置不同10ml量瓶中，纳他霉素用甲醇溶解并稀释至刻度，其他标准品用甲醇-乙腈-水溶液(1∶1∶1，V/V/V)溶解稀释至刻度，摇匀，于4℃冰箱保存。混合标准液(10μg/ml)：分别精密量取上述标准储备液各1ml，置同一100ml容量瓶，用甲醇-乙腈-水溶液稀释至刻度，摇匀，于4℃冰箱保存。

1.2.2试样制备

固体样品采用粉碎并匀质混合；半固体样品采用加热熔融或匀质混合；液体采用直接混合。称取5.0g处理好的试样，置于50ml离心管中，加入15ml甲醇-乙腈-水溶液，高速涡旋混匀10min，15000r/min离心10min，收集上清液至25ml容量瓶中，用甲醇-乙腈-水溶液定容至刻度。若样品蛋白含量较高，可加入乙酸锌和亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白。取1ml上述的溶液，过0.22μm滤膜，滤液供UPLC-MS/MS仪测定，外标法定量。

1.2.3色谱条件

色谱柱：WatersAcquityUPLCHSST3(2.1mm×10cm，1.8μm)；柱温：30℃；流速：0.3ml/min；进样量：10μl；流动相组成：A：5mmol/L乙酸铵水溶液，B：甲醇-乙腈(1∶1，V/V)，梯度洗脱，见表1。

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