固相萃取-高效液相色谱-串联质谱联用法快速测定中药材猴耳环中47种农药残留（一）

中药材猴耳环FoliumArchidendri为豆科植物猴耳环Archidendronclypearia(Jack.)Nielsen的干燥叶，具有抗真菌、抗病毒、抗炎、抗过敏、抗肿瘤、抗胃溃疡和抗结核等药理作用。目前，对猴耳环的研究多集中在品种归属、化学成分分离与药理作用，尚未见关于其农药残留的报道。本课题组在调研过程中发现，在猴耳环种植过程中存在使用未登记农药现象，对其农药残留处于监管盲区，导致其使用存在安全隐患。鉴于此，本研究选择47种农药进行筛查，包括：①课题组实地调查中发现种植过程中使用过的农药；②《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2020年版通则“农药多残留检测法第五法药材与饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法”中收录的部分禁用农药及农药代谢物；③适用于高效液相色谱-质谱联用仪检测的农药。根据猴耳环基质的特点，采用乙腈提取、HLB固相萃取柱净化的前处理方式，建立了一种简便、快速、稳定性好的农药多残留快速筛查方法。

1.材料与方法

1.1仪器与药剂

3200QTRAP质谱联用仪(美国ABsciex公司，分析软件Analyst1.6.3)；1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；AG245和XP-26电子分析天平(瑞士MettlerToledo公司)；MaxiMixⅡ涡旋混合器(美国Thermo公司)；ST-16高速匀浆仪(德国IKA公司)；Milli-Q超纯水制备系统(美国MilliQ公司)。47种农药标准品(表1)包括45种液体(浓度均为1000mg/L)及苯线磷砜和涕灭威砜2种固体(纯度≥98%)，德国Dr.EhrenstorferGmbH公司；乙腈和丙酮(色谱纯)，德国Merck公司；醋酸(色谱纯)、乙酸氨(色谱纯)和氯化钠(分析纯)，上海安普科技有限公司；Oasis亲水亲油平衡材料(HLB)固相萃取柱(规格200mg，6mL)，美国Waters公司；20批次猴耳环样品由广州莱泰制药有限公司提供。

1.2试验方法

1.2.1样品前处理

将猴耳环样品粉碎，过三号筛后，称取5g(精确到0.01g)于50mL聚苯乙烯聚塞离心管中，加入1g氯化钠，混匀，加入20mL乙腈，于8000r/min下匀浆提取20min，于3500r/min下离心5min；收集上清液，重复提取两次；合并上清液，于40℃水浴浓缩至3～5mL，用1～2mL乙腈多次洗涤并转移至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，于3500r/min下离心3min；取3mL上清液，过HLB固相萃取柱(无需活化，直接上样过柱)，收集全部净化液，混匀，待测。农药空白猴耳环基质同法制备。

1.2.2高效液相色谱-串联质谱检测条件

色谱条件：菲罗门KinetexC18色谱柱(100mm×2.1mm,2.6μm)及预保护柱(4mm×2.0mm，2.6μm)；流动相A相为95%乙腈(含5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸)，B相为水(含5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸)。梯度洗脱程序：0～1min，30%A；＞1～12min，30%→100%A；＞12～14min，100%A；＞14～15min，100%→30%A；＞15～20min，30%A。流速0.3mL/min；柱温40℃；样品盘温度20℃。进样体积2μL。

质谱条件：电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI+)，依赖保留时间的多反应监测模式(scheduledMRM)，检测窗60s。气帘气(CUR)0.01MPa，碰撞气(CAD)0.06MPa，喷雾电压(IS)5500V，离子化温度(TEM)600℃，雾化气(GS1)与辅助气(GS2)均为0.35MPa。47种农药保留时间及高效液相色谱-串联质谱参数见表1。

1.2.3标准溶液配制及标准曲线绘制

农药单一标准溶液：分别准确吸取45种液态农药标准品溶液(1000mg/L)1.0mL，用丙酮稀释，配制成质量浓度为100μg/mL的农药单一标准储备液；准确称取苯线磷砜和涕灭威砜2种固态农药标准品5mg(精确至0.001mg)，用丙酮溶解，配制成质量浓度为100μg/mL的农药单一标准储备液。所有储备液均于-30℃保存。

农药混合标准溶液：移取一定体积的47种农药单一标准储备液，用乙腈稀释，配制成农药混合标准溶液(表2)，于-30℃保存。

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