固相萃取-高效液相色谱-串联质谱联用法快速测定中药材猴耳环中47种农药残留（二）

基质匹配混合标准工作溶液：取1mL猴耳环空白基质溶液，采用氮吹浓缩至约0.5mL，分别加入农药混合标准溶液10、20、50、100、150和200μL，用乙腈稀释并定容至1mL，配制成系列质量浓度的基质匹配混合标准工作溶液，现配现用。

分别量取基质匹配混合标准工作溶液及将猴耳环样品粉碎，过三号筛后，称取5g(精确到0.01g)于50mL聚苯乙烯聚塞离心管中，加入1g氯化钠，混匀，加入20mL乙腈，于8000r/min下匀浆提取20min，于3500r/min下离心5min；收集上清液，重复提取两次；合并上清液，于40℃水浴浓缩至3～5mL，用1～2mL乙腈多次洗涤并转移至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，于3500r/min下离心3min；取3mL上清液，过HLB固相萃取柱(无需活化，直接上样过柱)，收集全部净化液，混匀，待测。农药空白猴耳环基质同法制备的样品溶液各1mL，加入0.1mL水，混匀，过0.22μm微孔滤膜。色谱条件：菲罗门KinetexC18色谱柱(100mm×2.1mm,2.6μm)及预保护柱(4mm×2.0mm，2.6μm)；流动相A相为95%乙腈(含5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸)，B相为水(含5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸)。梯度洗脱程序：0～1min，30%A；＞1～12min，30%→100%A；＞12～14min，100%A；＞14～15min，100%→30%A；＞15～20min，30%A。流速0.3mL/min；柱温40℃；样品盘温度20℃。进样体积2μL。质谱条件：电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI+)，依赖保留时间的多反应监测模式(scheduledMRM)，检测窗60s。气帘气(CUR)0.01MPa，碰撞气(CAD)0.06MPa，喷雾电压(IS)5500V，离子化温度(TEM)600℃，雾化气(GS1)与辅助气(GS2)均为0.35MPa条件测定，以各农药的质量浓度(x)为横坐标，以各农药的定量离子峰的峰面积响应值(y)为纵坐标，绘制校正曲线，权重系数选择1/x，得到47种农药的回归方程及相关系数。

2.结果与分析

2.1质谱条件的优化

采用农药单一标准溶液进行质谱扫描获取离子对信息，根据响应值优化碰撞电压、去簇电压等参数，每个待测物筛选出2～4组特征离子对。根据猴耳环基质特点，每种农药选择2组响应值高且干扰少的特征离子对作为监测离子对，其中丰度最高的选为定量离子对，所有离子对均为定性离子。选择依赖保留时间的多反应监测模式，在化合物保留时间±30s内扫描，获得准确的定性及定量结果。

根据《中国药典》进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与对照品一致，且离子丰度比与对照品的离子丰度比一致(相对丰度＞50%，允许±10%偏差；相对丰度＞20%～50%，允许±15%偏差；相对丰度＞10%～20%，允许±20%偏差；相对丰度≤10%，允许±50%偏差)，则可判定为检出。优化后的质谱参数见表1，典型色谱图见图1。

2.2样品前处理条件的优化

猴耳环药用部位为干燥叶，含水量低(低于8%)，且含较多叶绿素、纤维等。考虑到方法的通用性及便捷性，采用乙腈匀浆提取制备原液，但原液浑浊，呈深绿色，超过50%的检测指标回收率低于50%，基质干扰大，需要净化。HLB是由亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物，保留机理为反相，适用于pH值范围较宽的多种分析物。HLB固相萃取柱与乙腈提取液联合使用时无需活化，直接过柱，操作简单，大大降低了试验难度。结果表明，经HLB固相萃取柱净化后，80%以上的待测物回收率在70%～120%之间。

2.3基质效应

本研究采用绝对法评价基质效应(Me)，当Me在85%～115%时，基质效应在可控范围，基质效应对结果的影响可忽略，当Me＞115%或＜85%时，基质效应对结果的影响表现为抑制或增强效应，应对测得值进行校正。结果显示，有41种农药的Me在85%～115%之间，表明其影响可忽略不计；而甲胺磷受基质严重抑制影响(Me＜50%)，氧化乐果、吡虫啉、涕灭威亚砜和多菌灵受基质轻度抑制影响(60%＜Me＜85%)，敌百虫受基质轻度增强影响(Me＞115%)。因此，本研究采用基质匹配标准溶液进行校正。

2.4方法线性范围、灵敏度、准确度及精密度

结果显示，47种农药在各自的线性范围内，其质量浓度与对应的峰面积间均呈良好的线性关系(r＞0.9920)。以10倍信噪比的最低添加水平确定其定量限(LOQ)为0.001～0.015mg/kg。在LOQ、5倍LOQ、20倍LOQ3个添加水平下，47种农药在猴耳环中的平均回收率在54%～117%之间，RSD(n=6)在2.0%～15%之间，其中40种农药平均回收率在70%～120%之间，符合农药残留分析要求。部分农药的回收率较低，可能与复杂基质的干扰或自身极性、稳定性等理化性质有关。

2.5实际样品测定结果

根据产地及采集样本数目按比例选择20批样品，运用所建立的方法测定。结果显示，共有4批次样品检出农药(表3)。其中，苯线磷和甲胺磷均为农业农村部规定的禁用农药，炔螨特为常见的广谱杀虫杀螨剂。根据《中国药典》2020年版通则0212规定：禁用农药不得检出(低于定量限)，苯线磷与甲胺磷定量限分别为0.02和0.05mg/kg。表明样品残留量均未超过标准规定。

声明：本文所用图片、文字来源《中药材》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系

相关链接：N-乙烯基吡咯烷酮，二乙烯苯，吡虫啉，涕灭威亚砜