液相色谱-串联质谱法测定饲料中16种氨基酸 （二）

2结果与分析

2.1前处理过程的确定

根据GB/T 18246—2019中的前处理过程，对部分操作进行适当优化，经过试验验证，水解管不需在冷冻环境下进行充氮操作，只需用氮气赶尽管中的空气，因此直接将水解管置于氮气下充氮3 min即可；水解后分取的样液仅为0.1 m L，可直接在氮气下吹干，对实验室内环境不会造成太大污染，样液在氮气下吹干后，使用适合质谱仪的0.1%甲酸水溶液进行复溶，能够减小溶剂效应对试验结果的干扰。

2.2 16种氨基酸的线性方程和检出限（见表3)

将1.2中的16种氨基酸标准溶液稀释成浓度在0.01～50.00μmol/L的标准系列溶液，上机进行测定，以标准溶液浓度作为横坐标x（μmol/L），以峰面积作为纵坐标y建立标准曲线。由表3可知，16种氨基酸在0.01～50.00μmol/L范围内线性良好，相关系数均大于0.990 0。

以3倍的性噪比（S/N）所对应的质量作为检出限，结果显示16种氨基酸所能达到的检测低限为1～10 ng/g。

2.3 16种氨基酸的重复性测试（见表4)

称取同一样品共6份，按照1.3.4前处理方法制备样液，在试验条件下进行测定，以出峰时间计算定性重复性，以氨基酸含量计算定量重复性。由表4可知，16种氨基酸的定性重复性在0.02%～0.12%之间，定量重复性在0.11%～0.94%之间，表明方法具有较好的精密度。

2.4 16种氨基酸的回收率测试（见表5)

选用采购自美正公司的鱼粉质控样品，样品中16种氨基酸的量值及其扩展不确定度均为已知，按前处理过程处理试样，上机测定后计算回收率。由表5可知，16种氨基酸的回收率在97.3%～104.0%之间，实测结果与质控样标示量值的相对偏差均在2.0%以下，表明方法回收率良好。

2.5实际样品测定结果

选用配合饲料、浓缩饲料、鱼粉、肉粉等不同种类的样品共8份，采用GB/T 18246—2019与本方法同时对8份样品中16种氨基酸进行测定，结果表明，16种氨基酸的相对偏差均在5%以内，证明本方法测得结果准确可靠。

3结论

研究基于液相色谱-串联质谱仪定性准确、检测效率高等特点，通过优化样品前处理过程和液相色谱-质谱条件，建立能够同时测定饲料中16种氨基酸的检测方法。本方法处理过程简单、易操作，经试验证实检出限低、灵敏度高、精密度良好、回收率、准确度高。与检测用时较长的氨基酸分析仪相比，能够缩短分析时间、提高检测效率。研究为饲料中16种常规氨基酸含量的检测提供参考。

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